摘要：目的建立一种TaqManreal—timePCR探针杂交法，用于快速检测人rs12979860位点多态性。方法从人各不同组织器官中提取基因组DNA，利用小沟结合蛋白（MGB）探针的高度特异性，设计相应的引物探针，根据实时荧光定量PCR过程中产生的信号在2个检测通道的强弱变化来鉴别等位基因差异。最后所测样本经DNA测序验证结果的准确性。采用x。检验进行统计分析。结果利用TaqManMGB蛋白作为探针，能够区分只有1个碱基差异的目标基因组片段。该方法最低检测浓度为1．5ng／μl，扩增有效率达97．6％。不同组织器官（肾、心脏、子宫、血浆）及分泌物（鼻咽部）的DNA均可以用于检测。在随后对40例高加索人和50例黄种人的检测中亦证实，rsl2979860位点的基因型及等位基因频率存在差异，高加索人以CT基因型为主（26／40），而黄种人以cc基因型为主（40／50），差异有统计学意义（）（。=18．75，P〈0．05）。在两种族人群中，抗病毒治疗血清学转换与患者基因型之间差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论TaqManMGB法能快速并准确地区分rsl2979860位点多态性，具有高度特异性和灵敏度，适用于多种样本的临床检测，是对丙肝患者抗病毒个体化治疗进行遗传分析的理想工具。

摘要：目的:建立实时荧光定量PCR检测特异DD3基因方法,探讨其在前列腺癌早期诊断中的应用价值.方法:根据Genebank中的DD3mRNA全序列,设计DD3基因的特异引物和探针,构建用于制备DD3基因检测的定量标准品的克隆载体;建立DD3基因的实时荧光定量方法,分别用于前列腺癌患者全血、尿液、前列腺液标本的检测.结果:经稳定性、特异性、重复性和敏感性实验评价,DD3基因实时荧光定量PCR方法的最低检测限为1.64×103拷贝/L,线性范围为1.64×103～1.64×1015拷贝/L.对临床收集的19份前列腺癌患者,20份非前列腺癌患者、30份健康者的全血、尿液及前列腺液标本进行检测.19份前列腺癌患者标本中阳性率分别为100%(全血)、80%(尿液)、100%(前列腺液);20份非前列腺癌患者标本中只有1份前列腺液出现低拷贝值(1×105拷贝/L);30份健康者标本均为阴性.在全血、尿液、前列腺液标本中,前列腺癌患者DD3mRNA含量明显高于非前列腺癌患者和健康者(P<0.05).结论:DD3基因是一种用于前列腺癌早期诊断的特异性指标,可用于生物体液中少量癌细胞的检测,在前列腺癌早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面均具有潜在的应用价值.

摘要：0引言结核杆菌感染仍是当今世界范围内危害人类健康的严重问题，在发展中国家结核病为一种常见的传染性疾病. 目前，结核病的确诊手段主要依据实验室方法进行，其方法有直接涂片染色抗酸杆菌与结核菌的培养与鉴定，但直接涂片染色阳性率低，且不易于确诊，培养法时间长，达不到快速诊断的目的. 聚合酶链反应(PCR)技术，作为结核菌的非培养诊断技术，其特异性，敏感性，以及简便快速等优点在临床结核病的快速诊断上得到应用. 但是由于受多种因素的影响，使检测结果易出现假阳性及假阴性，给临床确诊带来困难. 我们通过设计一对结核菌特异性引物及特异性探针，采用微孔板反向杂交法，对PCR扩增产物进行液相杂交分析，以进一步提高检测结果的特异性和敏感性.

摘要：目的探讨结核分枝杆菌5种Rpf样蛋白(RpfA、RpfB、RpfC、RpfD、RpfE)的生物学活性及其促生长作用。方法根据GenBank中结核分枝杆菌H37Rv基因组核酸序列分别设计5种Rpf样蛋白特异性引物序列,采用PCR技术扩增目的片段,克隆、表达及纯化结核分枝杆菌的5种Rpf样蛋白,应用获得的Rpf样蛋白对藤黄微球菌、BCG和结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的促生长活性观察。结果成功获得了纯化的五种Rpf重组蛋白,其浓度分别为374.76μg/mL、300μg/mL、116.27μg/mL、306.9μg/mL、349.8μg/mL;促生长效果观察,其中RpfC无明显的促生长活性,RpfE的促生长活性最明显;A、B和D均有一定程度的促进这三种菌生长增殖的作用。结论Rpf样蛋白具有促进结核分枝杆菌增殖的作用,有可能成为一种新型的培养基添加剂,为结核菌的快速培养及相关研究奠定基础。

摘要：目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点。

摘要：目的　构建由缺氧反应元件串联重复体修饰的人端粒酶逆转录酶 (h TERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .方法　人工设计缺氧反应元件串联重复序列 ,克隆后插入 h TERT启动子上游并经测序证实 .将修饰后的 h TERT启动子和酵母胞嘧啶脱氨酶基因 FCY1插入穿梭质粒 ,与辅助质粒共转染 HEK2 93细胞 ,重组产生复制缺陷型腺病毒 .结果　获得了由 3倍和 6倍缺氧反应元件修饰的 h TERT核心启动子引导 FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒 .结论　基于 Cre重组酶 / lox P的腺病毒载体构建系统操作简便。

摘要：聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)又称体外 DNA 扩增技术或体外核酸克隆技术,自1985年初 Saiki 建立以来,在短短的几年内获得了很大发展。Hance 最先把 PCR 技术应用到结核杆菌的诊断后,国内外相继研究应用。参考国外文献,我们设计合成了一对引物。特异性地扩增结核菌 B

摘要：目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供依据,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。

摘要：目的:构建Atg5-真核表达载体并瞬时转染肺上皮细胞细胞株,探讨自噬在结核分枝杆菌感染上皮细胞中保护作用的分子机制。方法:设计针对Atg5的RNAi序列,化学合成后经过变性,退火连接到pSilencerTM3.1-H1hygro真核表达载体,经测序验证其正确性。脂质体法瞬时转染真核细胞A549,免疫印迹法检测瞬时转染的效果。用结核分枝杆菌分别感染正常和自噬表达低下的A549细胞,通过检测LDH来观察细胞的坏死情况。结果:成功的构建了pSilencerTM 3.1-H1 hygro真核表达载体并建瞬时转染了A549细胞株,成功抑制了细胞的自噬功能。Atg5-细胞对结核杆菌的抵抗能力下降。结论:在自噬表达低下的细胞中,细胞对结核分枝杆菌的抵抗能力有明显下降。在结核分枝杆菌感染上皮细胞的过程中,自噬是一种保护机制。

摘要：[目的]建立一种免疫磁珠吸附-荧光定量PCR(IMB-FPCR)快速检测阪崎肠杆菌的方法,探讨在乳制品污染监测及食物中毒快速诊断中的应用。[方法]根据阪崎肠杆菌rpsU-dnaG基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色色葡萄球菌检测的定量标准品,建立阪崎肠杆菌IMB-FPCR检测方法。[结果]成功构建了阪崎肠杆菌重组质粒标准品和阪崎肠杆菌IMB-FPCR方法。阪崎肠杆菌的免疫磁珠吸附试验显示磁珠对奶粉中的阪崎肠杆菌吸附率达77.7%。通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性,最低检测限为10cfu/ml的菌细胞,并具有良好的稳定性和重复性。整个检测仅需时1d。[结论]IMB-FPCR简便快速、灵敏度高及特异性强,为准确检测乳制品中阪崎肠杆菌提供了一个新的途径,可广泛应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。