摘要：【目的】利用反向遗传操作技术,构建含O型口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus,FMDV)3个拓扑型免疫优势结构蛋白基因的重组FMDV,评估其作为猪O型口蹄疫(food-and-mouth disease,FMD)疫苗候选株的潜力。【方法】通过基因合成,在FMD疫苗株O/HN/CHA/93(古典中国拓扑型)的基因中嵌合流行株O/NXYCh/CHA/2018(东南亚拓扑型)VP1结构蛋白的重组病毒骨架上,用O/TUR/5/2009疫苗株(中东-南亚拓扑型)VP1蛋白的G-H环基因替换其对等基因,构建含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组全长质粒,Not I线性化后转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞,拯救重组病毒。通过RT-PCR、序列测定、间接免疫荧光鉴定重组病毒;噬斑试验和一步生长曲线分析重组病毒的生物学特性。重组病毒制备疫苗免疫猪,用病毒中和试验分析其对当前流行的O型3个拓扑型FMDV的交叉反应性。【结果】成功拯救到含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组病毒,重组病毒与亲本病毒具有相似的生物学特性。亲本病毒和重组病毒制备的疫苗免疫猪,均能够对中东-南亚型(Middle East-South Asia,ME-SA)拓扑型和东南亚型(South-East Asia,SEA)拓扑型病毒株产生保护性平均中和抗体(>1.65log10);均不能对古典中国型(Cathay)拓扑型流行株产生保护性平均中和抗体(<1.65log10),但与亲本病毒相比,O/TUR/5/2009疫苗株G-H环基因的替换显著提高了对ME-SA和SEA拓扑型病毒株的交叉反应性(P<0.05)。【结论】本研究对未来FMD疫苗的设计具有重要的指导意义。

摘要：针对微电扫描成像测井仪国内的研究现状以及存在的问题,提出了一种采用CAN总线提高仪器测速的设计方法;该设计采用DSP芯片ADSP-21992作为主控制器,利用其内置的CAN通信模块,实现了CAN总线替代原有数据遥传总线;通过两次实地的测井试验,证明采用CAN总线的微电扫描成像测井仪在特殊环境和要求下实现了快速扫描测井模式,将原仪器的测量速度提高一倍,能够稳定地完成整个测井过程,数据经分析对比真实可信,这为微电扫描成像测井仪性能的进一步提高打下了基础。

摘要：美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在我国出现了多种基因亚型毒株混合流行和重组的复杂变化,其引起的猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveand Respiratory Syndrome,PRRS)已成为危害程度仅次于非洲猪瘟的重要疫病。为建立一种快速而敏感性高的美洲型PRRSV检测方法,本研究分析了国内美洲型全基因组序列,利用重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),设计合成特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法,通过特异性、敏感性、重复性试验及田间样品的比对检测,评价该方法的检测能力,并测定和分析了田间阳性样品的ORF5基因序列。结果显示,该方法在42℃、20 min内即可完成检测,最低检测美洲型PRRSV载量为50拷贝/μL,且与欧洲型PRRSV、口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应,特异性好;检测50份田间样品该方法的阳性检出率为34%,与实时荧光RT-PCR检测结果的符合率为100%;ORF5序列分析显示检出阳性样品中NADC30-Like毒株占比为88%。结果表明,本研究建立的美洲型PRRSV实时荧光RPA检测方法特异性强、敏感性高,满足PRRSV的快速诊断和流行病学调查。

摘要：为提高实验室诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的准确性,本研究分析了近几年国内流行的PRRSV毒株序列,针对主要流行的美洲型和欧洲型毒株设计合成特异性引物,建立PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,通过特异性、敏感性和重复性试验,与实时荧光RT-PCR对比检测田间样品,评价该方法的检测能力。结果显示,本研究筛选出了3对特异性引物,成功建立了PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,扩增目的片段大小分别为408 bp、548 bp、689 bp,至少扩增出任意一条特异性条带即可判为阳性;对口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒均无特异性条带扩增;检测美洲型经典毒株VR-2332、高致病性毒株GSWW15株和NADC30样毒株GSWW18的最低病毒量范围为25~50 TCID_(50)/mL;45份田间临床样品的比对检测结果显示,本研究建立的多重RT-PCR检测方法检出阳性率为33.3%,与实时荧光RT-PCR方法的检测结果符合率为95.6%。结果表明,本研究建立的PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PRRSV流行病学的调查,具有良好的应用前景。

摘要：【目的】测定一株A型口蹄疫流行毒株的全基因组序列,并构建其全长感染性克隆。【方法】参照已公布的A型口蹄疫病毒序列设计引物,将分离的口蹄疫病毒株A/Sea-97/CHA/2014全基因组分为4个重叠的片段进行RT-PCR扩增,并对其进行序列测定与分析。利用酶切连接法将4个基因片段依次克隆至p Blue Script SKhdv载体中,构建该流行毒株的全长c DNA克隆p QAHN。pQAHN经NotⅠ线性化后转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞,拯救病毒。【结果】口蹄疫病毒全基因组序列测定结果表明该毒株基因组全长8 171 bp[不包括poly(C)区段和poly(A)尾巴],开放阅读框为6 996 bp,编码2 332个氨基酸,5′和3′非编码区分别为1 091 bp和95 bp。VP1系统发生树分析表明该毒株与A/GDMM/CHA/2013毒株亲缘关系最近,相似性为99.1%。线化全长质粒转染BSR/T7细胞68 h后可观察到典型的细胞病变。拯救病毒的间接免疫荧光、RT-PCR和序列测定结果表明成功拯救出了具有感染性的FMDV。拯救病毒与亲本病毒的噬斑表型及生长曲线试验表明二者具有相似的生长表型和增殖能力。【结论】该研究为我国口蹄疫病原生态分布、分子流行病学调查以及A型FMD新型疫苗的研究提供了有益的材料。

摘要：使用马铃薯的偏爱密码子设计合成人胰岛素原基因,以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,构建由patatin启动子调控的人胰岛素原基因植物表达载体p1301Ph,并将导入根癌农杆菌LBA4404中,经PCR鉴定证明,此基因已整合到农杆菌Ti上。表达载体的建立为日后转基因工作奠定了基础。

摘要：虽然阵列感应仪器用于商业化服务快接近20年了，但感应仪器的设计者们一直都在思考一些令他们感到比较困惑的问题，也就是前几代仪器在硬件设计和数据处理上还不尽人意。对这些问题的折中处理可能引起测量数据的各种不确定性。并最终降低了测井响应的质量。现已开发设计出一种新型的阵列感应仪器用于解决这些问题。所有的阵列感应仪器都可以测得聚焦深度为10～120in的径向电阻率曲线，但很少有用户知晓这种由仪器的基本子阵列设计所引起的潜在的不确定性问题。在新型仪器中，每一条计算出的径向曲线与某些特定的子阵列密切相关。这样，该仪器可以获得外插值最少的径向曲线。因此，提交给用户的径向电阻率曲线更准确，对井眼及其周围地层的描述更真实。本文也讨论了仪器在刻度方法和温度影响校正方面所取得的进展。虽然这两个问题在以前的论文著作中很少受到关注，但它们却与感应测量的精度和重复性息息相关。本文所描述的严格的刻度方法确保了大部分仪器的精度。也确保了仪器对刻度环境的非敏感性。本文研究了温度对感应仪器测量值影响的复杂性和影响大小，也采用了可靠的热动态方法对其进行校正。本文最后强调了其它几种方法：趋肤效应校正方法仅采用同相位信号（实部）测量值，并对视电导率和几何因子进行趋肤效应校正；实时井眼校正方法利用自适应反演得到井眼尺寸、仪器偏心距和泥浆电阻率，计算出井眼影响；采用新反演方法提高实时径向反演的效率和稳定性。