摘要：乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区Ａ８３点突变使ＨＢｅＡｇ消失，而病毒复制和病变活动持续，这一变异毒株相当多见。为建立一种较简易的检测方法，我们设计一种针对Ａ８３变异株的错配引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，可在Ａ８３变异株的扩增片段里引进Ｂｓｕ３６Ⅰ限制酶位点（错配ＰＣＲ），然后将扩增片段（１０２ｂｐ）用该酶消化，含变异株者电泳分析－８２ｂｐ片段，经测序验证结果完全符合。

摘要：乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区Ａ＿８３点突变相当常见。我们设计一种错配引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）在含Ａ＿８３的序列中引进Ｂｓｕ３６１限制酶位点，经酶切即可检出Ａ＿８３。用以分析急慢性ＨＢＶ感染７７例：在乙型肝炎ｅ抗体（抗一ＨＢｅ）（＋）４８例中检出Ａ＿８３优势感染６５％；乙型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）（＋）２９例中检出Ａ＿８３非优势混合感染３８％。急性乙肝和慢性无症状ＨＢＶ携带者中均不见Ａ＿８３。提示变异须经较长期的免疫选择后产生。变异所致ＨＢｅＡｇ消失可能是病变激活的原因，因而在ＨＢＶ携带者转为急性肝炎时可检出Ａ＿８３。在不同慢性肝病中，Ａ＿８３数相近，可能这一变异仅使ＨＢＶ感染持续。

摘要：为建立一种简易的检测ＨＢＶ前Ｃ区Ａ８３点突变的方法，设计了一种针对Ａ８３变异株的错配引物，通过ＰＣＲ，可在Ａ８３变异株的扩增产物中引入一个ＢＳＵ３６Ｉ限制酶位点，将扩增产物（１０２ｂｐ）用该酶消化，含变异者显示８２ｂｐ的酶切片段，以此判定的变异与测序结果一致。用本法检测了慢性乙型肝炎１２例和随访ＨＢｅ血清转换者５例，结果表明前Ｃ区Ａ８３变异与病变发展一致。

摘要：目的　建立三种乙型肝炎 (乙肝 )病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法 ,了解这三种耐药突变在拉米夫定治疗患者中的发生情况。方法　设计 3对HBVP基因引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增 ,应用NdeⅠ和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切 ,酶切产物用电泳加以分析。应用此方法检测 70例拉米夫定治疗的慢性乙肝患者中 3种拉米夫定耐药突变的发生情况。结果　NdeⅠ和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切可有效区分HBV野株和YMDD(酪氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸 )变异株 ,并确定是YI(异亮氨酸 )DD或YV(缬氨酸 )DD变异。用NlaⅢ内切酶对PCR扩增产物酶切可有效区分HBV野株和L5 2 6M(第 5 2 6位氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸 )变异株。利用此方法发现 11例患者在服用拉米夫定过程中出现耐药突变 ,其中YIDD变异 6例 ,YVDD变异 5例 ,后者有 1例伴有L5 2 6M点突变。结论　本方法只需应用常规PCR和酶切技术 ,既可有效筛检出YMDD变异株标本 ,还可以确定属于YIDD还是YVDD变异 ,或是否伴有L5 2 6M点突变等 ,均可作为临床监测拉米夫定耐药性的参考。

摘要：目的 建立一种简便易行的乙型肝炎病毒基因型分型方法（只需 ＰＣＲ）。方法 对 ＧｅｎＢａｎｋ中查获的１１４例ＨＢＶ全序列进行比较分析，找出每种基因型相对于其他５种基因型的独特序列，并根据这些独特序列设计出６对分别针对Ａ－Ｆ基因型的特异引物。用这６对引物分别对标本进行ＰＣＲ，根据阳性结果判断出标本的基因型。进一步简化该方法，用多引物对ＰＣＲ法（ＰＣＲ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒａｌ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔｓ ｉｎ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｔｕｂｅ，Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ）将Ｂ、Ｃ、Ｄ ３种基因型的特异引物混台进行ＰＣＲ，根据扩增片断的大小判断基因型。用此方祛对已鉴定的Ｂ、Ｃ、Ｄ型标本进行比较和验证。结果 单引物对ＰＣＲ与多引物对ＰＣＲ的分型结果一致，且与以前用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法的分型结果一致。结论 用多引物对ＰＣＲ分型法准确易行，灵敏性高，便于推广应用。

摘要：目的建立可用于研究工作的血清学检测方法。方法按ＧｅｎＢａｎｋ的Ｆａｓ和ＦａｓＬ序列设计引物，以相应质粒作阳性材料，建立各自的ＲＴ－ＰＣＲ。结果２７例慢性乙型肝炎血清检出ｓＦａｓＬ－ｍＲＮＡ１３例（４８．２％），ｓＦａｓ－ｍＲＮＡ２１例（７７．８％）。结论目前尚无检测血清抗原的试剂、相关研究工作中可应用这一技术。

摘要：采用分子生物学方法 ,设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV的Pre C/C片段 (1814～ 2 45 2 ) ,经酶切后连于EBO真核表达载体 ,利用定点突变技术分别对连接载体进行T186 2 ,A1896 ,A1899,A1896 +A1899点的定点诱变。经错配PCR RFLP和测序分析 ,确定突变的克隆。将突变前后的质粒以脂质体转染法转染HepG2细胞 ,检测不同点突变后HBeAg表达的改变。突变前后的质粒转染HepG2细胞经稳定表达 ,结果未突变的EBO PreC/C重组质粒HBeAg表达为强阳性 ,A1899突变的重组质粒HBeAg表达比未突变的重组质粒稍弱 ,而转染EBO空载体和T186 2 ,A1896 ,A1896 +A1899重组质粒突变体的细胞培养上清HBeAg均为阴性。

摘要：目的　建立乙型肝炎病毒 (HBV)S基因聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)的基因型分型方法并验证其准确性。方法　比较GenBank中HBV 2 2 3株各基因型全序列的S基因氨基酸及核苷酸序列 ,设计限制性内切酶BsrI、StyI、DpnI和HpaII鉴别HBVA F基因型的方法。选择经前SPCR PFLP的方法已鉴定出的HBVB、C和D基因型标本各 3 0例 ,用此方法鉴定验证 ,并随机对HBVB、C和D基因型各 3株标本进行S基因测序证实。结果　两种PCR RFLP及S基因测序鉴定HBV基因型结果一致。结论　S基因PCR RFLP的方法能够准确鉴定HBV基因型。此方法灵敏性高 ,特异性强 ,且酶切图谱简明单一 ,易于识别 ,适宜于HBV基因型的流行病学调查。

摘要：目的　建立PCR结合酶切的方法监测慢性乙型肝炎患者体内拉米夫定耐药突变株的产生 ,并与PCR产物克隆后测序相结合 ,了解此方法的可靠性和可行性 ,同时用此方法筛查 5 0例应用拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者中耐药株的发生情况。方法　拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者5 0例 ,治疗时间 9个月～ 2 4个月 ,设计错配PCR结合限制性片段长度多态性方法 ,快速检测患者体内乙型肝炎病毒 (HBV)酪氨酸 蛋氨酸 天门冬氨酸 天门冬氨酸 (Tyrosine Methionine Asparticacid Asparticacid ,YMDD)变异株的发生情况 ,对筛检耐药株阳性的标本应用PCR产物克隆后测序加以证实。结果在 5 0例服用拉米夫定患者中发现 9例患者在用药超过 9个月时出现拉米夫定耐药突变株 (YMDD变异株 ) ,其中YIDD变异 5例 ,YVDD变异 4例 ,后者有 3例合并有L5 2 6M突变。结论　本方法在检测YMDD变异方面具有快速简便的特点 ,经克隆后测序证实 ,具有较好的可靠性。

摘要：研究 Ａ８３点突变的生物学意义。采用分子生物学方法，设计引入 Ｋｐｎ　Ｉ和 Ｈｉｎｄ　ＩＩＩ酶切位点的引物扩增乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型的ＰｃＰ１０标准株中的Ｐｒｅ—Ｃ／Ｃ片段（１８１４—２４５２），经Ｋｐｎ　Ｉ和Ｈｉｎｄ　ＩＩＩ双酶切后，在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下连于ＥＢ病毒真核表达载体，利用定点突变技术对连接载体进行１８９６点的定点诱变。经错配ＰＣＲ—ＲＦＬＰ和测序分析，确定突变的克隆。提取突变前后的质粒转染 ＨｅｐＧ２细胞。突变后在 Ｐｒｅ－Ｃ／Ｃ第２８位氨基酸形成终止密码，使ＨＢｅＡｇ合成终止，转染ＨｅｐＧ２细胞后未能检测到ＨＢｅＡｇ，而未突变的重组质粒则ＨＢｅＡｇ表达为强阳性。ＨＢＶ Ａ８３点突变真核表达载体的构建为体外研究该点突变对ＨＢｅＡｇ表达的影响以及ＨＢｅＡｇ阴性的乙型肝炎病毒感染的致病机理奠定基础。