摘要：丙二烯氧化物环化酶(allene oxide cyclase,AOC)是茉莉酸生物合成途径中的一个关键酶,在植物防御反应中发挥重要作用。本研究根据白木香转录组高通量测序结果设计引物扩增,利用RT-PCR技术从白木香中首次克隆得到1个AOC基因,命名为AsAOC1,并进行生物学信息分析、原核表达和纯化、组织特异性分析及非生物胁迫和激素诱导表达分析。白木香AsAOC1基因的开放阅读框(ORF)长753 bp,编码251个氨基酸,其蛋白分子质量是27.46 kD。生物学信息分析表明AsAOC1蛋白包含1个保守的allene_ox_cyc结构域,系统进化树显示AsAOC1蛋白与川桑(Morus notabilis)AOC蛋白具有较高的同源性。构建原核表达载体pET28a-As AOC1并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达AsAOC1重组蛋白,利用Ni^(2+)亲和色谱纯化得到可溶性AsAOC1重组蛋白。实时荧光定量PCR检测结果表明AsAOC1基因在茎中表达量最高,根与茎尖次之,叶中表达量最低。盐、干旱、低温以及重金属胁迫均能够诱导白木香愈伤组织中AsAOC1基因表达;茉莉酸甲酯、水杨酸、赤霉素和脱落酸诱导后,愈伤组织中AsAOC1基因的表达量明显上升。本研究为进一步研究茉莉酸途径在白木香结香机制和植物防御反应中作用奠定基础。

摘要：目的采用分子模拟方法探究巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)与异噁唑类抑制剂的结合模式及相互作用,设计出更强抗炎活性的MIF抑制剂。方法基于MIF与典型的异噁唑类抑制剂ISO-1及其类似物ISO-66的晶体结构1LJT、4K9G,采用Glide半柔性分子对接方法中3种不同精度的打分函数(HTVS、SP、XP),将已知的ISO-1系列抑制剂分别对接到MIF结合口袋中。通过比较对接打分与实验活性的线性相关性,获得最优的晶体结构和打分模式;接着分析MIF重要氨基酸残基与ISO-1类似物侧链基团的相互作用及结构决定性因素。在此基础上,设计了6个新颖的MIF抑制剂分子,并对它们进行分子对接打分及成药性预测。结果根据对接打分发现,4K9G-HTVS模式可以获得最佳的受体-配体结合亲和力排序,通过在R侧链引入较大的非极性基团可以与Pro33、Ile64、Trp108、Phe113等形成较强的疏水相互作用。理论预测结果显示,设计的6个新颖结构的ISO-1类似物,具有较强的MIF抑制活性和较好的成药性。结论本文计算结果为深入了解MIF与配体的结合机理,理性设计具有更强抗炎活性和成药性的ISO-1衍生物提供了理论基础。

摘要：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PDH)是戊糖磷酸途径的关键酶,在植物响应胁迫方面发挥重要作用。本研究对白木香转录组数据进行分析,设计特异性引物,首次从白木香中克隆得到3条AsG6PDHs基因的cDNA序列,分别命名为AsG6PDH1、AsG6PDH2和AsG6PDH3,其开放阅读框(ORF)分别为1809、1767、1548 bp,编码蛋白分别含有602、588、516个氨基酸,蛋白分子质量分别为68.02、67.02、59.35 kDa。3个G6PDH蛋白的氨基酸序列与其他植物G6PDH的氨基酸序列相似性比较高,都含有G6PDH蛋白的3个特征性序列。系统进化树显示AsG6PDH1和AsG6PDH2属于质体G6PDH,AsG6PDH3属于胞质G6PDH。组织特异性分析结果表明,AsG6PDH1和AsG6PDH2主要在根中表达,AsG6PDH3在各组织中表达量都比较高,茎中表达量最高。实时荧光定量PCR结果显示盐、干旱、低温和重金属胁迫都能够诱导白木香中3个AsG6PDHs基因表达,其中干旱胁迫对AsG6PDH1和AsG6PDH2的转录水平影响最显著,重金属胁迫对AsG6PDH3的表达水平影响最显著。同时,盐、干旱、低温和重金属胁迫都能够提高愈伤组织中G6PDH酶活性,其中干旱胁迫对白木香愈伤组织中G6PDH酶活性影响最显著。本研究为进一步阐明G6PDH基因在白木香防御反应中的作用和沉香结香机制奠定基础。

摘要：信号肽肽酶在生物的生命过程中起到重要作用。本研究根据白木香转录组高通量测序结果设计引物,结合RACE及RT-PCR技术从白木香中克隆得到信号肽肽酶AsSPP1基因全长,并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测AsSPP1基因在不同组织以及在NaCl、重金属、低温、干旱胁迫和ABA、GA3、MeJA、SA处理下的表达差异。本研究中克隆获得的AsSPP1基因全长1 063 bp,编码353个氨基酸。AsSPP1基因在茎中的表达量最高,其次是叶和茎尖,在根中的表达量最低。盐、重金属和低温胁迫能够诱导AsSPP1基因的表达,而干旱胁迫则降低AsSPP1基因的表达。ABA、SA和MeJA能够诱导AsSPP1基因的表达,而GA3对AsSPP1基因表达影响不大。这些研究结果表明AsSPP1基因可能在白木香防御反应中起重要作用。

摘要：皮肤镜检查是伴随皮肤影像技术发展起来的一种无创性皮肤辅助诊断方法,主要用于皮肤良、恶性肿瘤的早期预判和辅诊,在皮肤外科、整形外科和激光美容等领域应用较为广泛。我们在传统的PBL教学模式中,创新性地引入经典的皮肤镜影像素材,使标准化病例在具体的临床实践教学中更加形象生动,主要聚焦于快速有效提高医学生以临床能力为导向的皮肤无创诊疗水平。