摘要：建立了奶粉中可致婴幼儿高死亡率的阪崎肠杆菌的PCR和荧光PCR检测方法。利用细菌16S和23SrDNA的保守区设计通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S-23SrDNA间区序列(ITS)进行扩增和测序,在比对阪崎肠杆菌ITS序列的基础上,设计了11条PCR和荧光PCR检测引物,组合成30对PCR引物,并筛选出一对种特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR检测方法。用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌株验证实验表明,本文所建立的PCR和荧光PCR方法特异性强;加菌实验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为(2.2～5.4)CFU/100g,灵敏度高;新建的PCR和荧光PCR方法与FDABAM(美国食品及药品管理局微生物分析手册)方法比对实验表明,三种方法的检测结果完全一致。由于PCR和荧光PCR检测方法快速、可靠,因此可替代传统检验方法。

摘要：建立一种多重PCR技术结合基因芯片检测方法,实现嗜肺军团菌15种血清型的快速、准确检测。根据嗜肺军团菌15种血清型的O抗原特异性基因设计并筛选合适的引物和探针,进行多重PCR扩增,制备寡核苷酸芯片。将多重PCR扩增产物与带有特异探针的芯片杂交。用扫描仪扫描,判定嗜肺军团菌的血清型。该基因芯片可特异性的检测嗜肺军团菌的15种血清型,具有良好的特异性,芯片纯菌DNA检测灵敏度为10ng。所建立的嗜肺军团菌15种血清型基因芯片检测方法特异性好,灵敏度高,具有较好的实用性。

摘要：目的:建立检测食品中桃仁、杏仁过敏原成分的荧光PCR方法,比较国外3种ELISA试剂盒效果。方法:针对杏仁Prudu1基因设计引物及探针,建立荧光PCR方法。利用杏仁过敏原参考物质对3个品牌的ELISA试剂盒的回收率进行比较。结果:建立的荧光PCR方法,具有很好的特异性;灵敏度为10mg/kg。结论:桃仁及杏仁过敏原成分荧光PCR检测方法特异性好、灵敏度高,对食品中过敏原的检测有重要的实际意义。

摘要：建立一种多重PCR技术结合基因芯片检测方法,实现多种致泻性大肠杆菌(EPEC、ETEC、EIEC、EHEC、EAEC和大肠杆菌O157)的快速、准确检测。筛选肠致病性大肠杆菌、产肠毒素大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌及大肠杆菌O157的特异基因作为目的基因。设计9对引物和23条探针,进行多重PCR扩增,制备寡核苷酸芯片。将多重PCR扩增产物与带有特异探针的芯片杂交。用扫描仪扫描,判定细菌种类及型别。该基因芯片可特异性的检测EPEC、ETEC、EIEC、EHEC、EAEC和大肠杆菌O157,具有良好的特异性,致病菌检测灵敏度可达104cfu/mL。所建立的多种致泻性大肠杆菌基因芯片方法检测方法特异性好,灵敏度高,具有较好的实用性。

摘要：目的：建立一种新型阪崎肠杆菌快速筛选检测方法——交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法。方法：针对阪崎肠杆菌16S-23SrDNA间区序列设计特异性引物及探针，建立交叉引物等温扩增法，利用免疫金标试纸条对结果进行检测。用18株阪崎肠杆菌及其他36株近源菌进行特异性试验；通过定量DNA、纯菌液计数、添加干扰菌检测进行灵敏度验证。结果：建立方法具有很好的特异性；增菌液检测灵敏度为10^1CFU／mL，DNA检测灵敏度为10^0fg／test。结论：建立的交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法特异性好、灵敏度高，不需要复杂仪器，对口岸快速筛查、基层或偏远经济不发达地区顺利开展检测具有实际意义。

摘要：目的:研究奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法。方法:针对坂崎肠杆菌16 s^23 s rDNA间区序列(ITS)设计一对SYBR G reenⅠ染料法引物、一对TaqM an探针法引物及探针,建立奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法,并对实时荧光PCR法、传统方法及PCR方法进行比较。结果:用10株坂崎肠杆菌,18株近源菌验证试验表明,本文所建立的两种实时荧光PCR方法特异性强;加菌试验表明,奶粉中坂崎肠杆菌有1.1 cfu/100 g时就可检出,灵敏度高;检验时间仅需2 d。结论:本文提出的奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法可在实际工作推广。

摘要：本研究利用嗜肺军团菌O抗原基因簇wzt基因为靶基因,设计并筛选出一对实时荧光PCR引物和TaqMan探针,建立了嗜肺军团菌血清1型(Lp1)实时荧光PCR检测方法。特异性试验显示,3株Lp1出现了典型的扩增曲线,23株近源参考菌株没有扩增。灵敏度试验显示,水中Lp1的检测底线可达到1.1×10^(2) CFU/mL。重复性试验结果显示,高、中、低浓度扩增Ct值相对标准偏差分别为0.51%、0.42%、0.31%。结果表明,该方法特异性好、灵敏度高、重复性好、检测流程短,适于水环境污染状况调查及应急事件快速检测。

摘要：根据产酸克雷伯氏菌多聚半乳糖醛酸酶基因设计并筛选出一对实时荧光PCR特异性引物及Taq Man探针,建立了婴儿配方奶粉中产酸克雷伯氏菌实时荧光PCR检测方法。特异性实验结果表明,6株产酸克雷伯氏菌参考菌株出现了特异性扩增,18株近源参考菌株没有特异性扩增;灵敏度实验结果表明,婴儿配方奶粉中产酸克雷伯氏菌检测低限可到达10^(0)cfu/100 g数量级。该方法特异性好,检测灵敏度高,检测流程短,可在实际工作推广。

摘要：〔目的〕建立和提出奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法。〔方法〕利用细菌16S和23SrDNA的保守区作为通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S^23SrDNA间区序列(ISR)进行了扩增和测序,在比较阪崎肠杆菌与其近源株16S1~23SrDNA间区序列的基础上,设计了11条阪崎肠杆菌PCR检测引物,组合成30对PCR引物并筛选出一对阪崎肠杆菌PCR检测的特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法。〔结果〕用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌验证试验表明,本文所建立的PCR方法特异性强;加菌试验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为2.2~5.4cfu/100g,灵敏度高;新建的PCR方法与FDABAM方法比较试验表明,两种方法的检测结果完全符合。〔结论〕本文提出的奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法填补了国内空白,达到了国际先进水平,可在实际工作中推广。