摘要：目的研究NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)在D-半乳糖诱导的老化大鼠外周听觉系统耳蜗和中枢听觉系统听皮层组织中的表达,探讨老年性耳聋氧化性损伤的发生机制。方法 48只1个月龄雄性Spragua-Dawley大鼠按数字随机法分成两组,每组各24只。D-半乳糖组:每日颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg/kg),连续8周;对照组:每日颈背部皮下注射同体积的生理盐水,连续8周。造模完成后,取两组大鼠外周听觉系统耳蜗和中枢听觉系统听皮层组织,利用免疫组织化学法检测DNA氧化损伤生物标记物8-羟基-2-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHdG);利用实时定量PCR检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)普遍缺失(common deletion,CD)和NOX基因的表达;利用Western blot检测NOX蛋白表达;应用Taqman PCR检测mt DNA CD。所有实验数据采用两样本的t检验进行分析。结果 D-半乳糖组和对照组大鼠相比较,D-半乳糖诱导的老化大鼠8-OHdG的表达在耳蜗和听皮层组织中明显增多,两组比较差异具有统计学意义(t分别为6.341、10.589,P均<0.05);NOX3基因和蛋白的表达在耳蜗组织中明显增强,两组比较差异具有统计学意义(t分别为8.491、18.983,P均<0.05);NOX2基因和蛋白的表达在听皮层组织中明显增强,两组比较差异具有统计学意义(t分别为3.548、8.219,P均<0.05);mtDNA CD的累积在耳蜗和听皮层组织中明显增多,两组比较差异具有统计学意义(t分别为9.796、7.901,P均<0.05)。结论在听觉系统老化过程中,NOX是活性氧的重要来源,可能是导致老年性耳聋氧化性损伤发生的重要原因。

摘要：比较了甲磺酸酚妥拉明速释片和普通片在家狗体内药代动力学和相对生物利用度。采用随机交叉分组实验设计,给4条家狗分别给予50 mg的甲磺酸酚妥拉明速释片和普通片,po,按设计采集12 h内动态血标本,以HPLC法测定血浆血药浓度,以一室模型计算2种制剂在动物体内的药动学参数和相对生物利用度。结果家狗口服后,其体内血药浓度-时间曲线符合一室模型。速释片和普通片的主要药代动力学参数分别是T_(max)为0.69 h和1.50 h,C_(max)为92.62 ng·mL^(-1)和82.22 ng·mL^(-1),AUC为214.43 ng·h·mL^(-1)和254.12 ng·h·mL^(-1)。配对t检验结果表明,只有T_(max)有显著性差异(P0.05)。

摘要：目的研究新型自组装多肽CR-16的性质及其对于大肠杆菌的抑菌活性,为细菌感染的治疗提供实验依据。方法在抗菌肽BuforinⅡ和LfcinB结构基础上,设计并合成了新型抗菌肽CR-16,采用粒径、电位、透射电镜、X线衍射仪等手段表征该抗菌肽的性质。在测定临界胶束浓度的基础上,采用原子力显微镜、圆二色谱法等对分子的自组装性能进行考察。采用二倍稀释法测定该肽的最小抑菌浓度,并运用透射电子显微镜分析其对细菌外膜的影响。结果抗菌肽CR-16能够成功自组装,自组装体呈现规则圆球状,性质稳定。抑菌实验表明,CR-16对3种大肠杆菌的生长均有抑制作用。值得重视的是,CR-16对产新德里金属-β-内酰胺酶1(NDM-1)的耐碳青霉烯类大肠杆菌生长有明显抑制作用,显示了其在抗细菌感染及抗耐药菌感染中的良好前景。结论CR-16抗菌肽可以实现自组装,并且对大肠杆菌具有抑菌活性。

摘要：目的制备盐酸异苯环戊胺胶囊并对其质量进行考察。方法通过相容性实验选择适宜的辅料,设计筛选处方和制备工艺,评价内容物的粉体学特性、吸湿性和制剂的基本性能及稳定性。结果制备的处方为:盐酸异苯环戊胺10 mg、无水磷酸氢钙128.7 mg、甘露醇128.7 mg、微粉硅胶2.7 mg。中间体粉末的休止角(30.71±1.09)°、松密度(0.76±0.01)g/ml、轻敲密度(0.90±0.02)g/ml、Hausner比值1.19±0.01、Carr指数(15.86±1.05)%,流动性和填充性良好,吸湿率低。含量、含量均匀度和溶出度均符合要求,6个月加速和长期稳定性实验中制剂质量保持稳定。结论处方简单、合理,制备工艺重现性良好,适于工业化生产。

摘要：目的鉴定一个中国人手足裂畸形(SHFM)家系的致病突变,揭示该家系中手足裂畸形发生的分子遗传基础。方法回顾家系(4代共5例患者)中3例患者已有X线检查资料,补拍畸形手足外观照片。采集其中2例患者外周血进行高分辨G显带核型分析。从现有4名家系成员(包括3例患者)外周血样品中提取基因组DNA。针对TP63基因全部16个外显子(包括外显子/内含子交界区)设计并合成引物,以1例患者基因组DNA为模板进行聚合酶链反应(PCR)扩增和产物直接测序。在已知的5个SHFM位点染色体区域选择微卫星标记,通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析家系成员的基因型。对染色体10q24.3区域SHFM3位点内微卫星标记的多态片段进行测序分析,比较患者和基因型相同的正常对照个体不同等位片段测序峰高度的差别。结果家系中现存3例患者双手均为桡侧指/掌骨缺失,2例患者双足表现中央轴趾/跖骨缺失,1例患者双足仅剩腓侧趾/跖骨,都符合典型手足裂畸形的临床表现。对患者进行高分辨G显带核型分析,未见染色体数目异常或结构畸变;对患者DNA进行TP63基因测序,未发现突变。通过检测微卫星标记进行基因型分析,发现患者在SHFM1、SHFM4和SHFM5三个位点不表现单体型共享,而在SHFM2和SHFM3两个位点则共享某一单体型,提示本家系中手足裂畸形表型可能由SHFM2或SHFM3位点的突变引起。进一步分析SHFM2和SHFM3两个位点微卫星标记的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果,发现患者在SHFM3位点的患者共享等位片段呈现信号增强现象。以相同基因型正常人为对照个体进行微卫星标记的比较测序分析,发现患者间共享等位片段的测序峰在患者中增高约1倍。以上结果表明,本家系患者发生了SHFM3位点内的DNA重复。结论首次在中国人手足裂畸形患者中发现染色体10q24.3区域DNA重复突变。

摘要：奶牛乳房炎是指奶牛乳腺组织的各种炎症,是奶牛最常见的疾病之一,且其发病率呈上升趋势。据报道,奶牛乳腺炎的发病率约在25%~60%之间,中国的平均临床率为33.4%。研究证实,综合评估各种因素造成的损失,产奶量和牛奶质量损失占总损失的49%。根据相关统计,我国现有奶牛1400万头左右,每年因乳房炎造成的经济损失超过6亿元。

摘要：为避免现有的多片段质粒构建技术的弊端,提高多片段质粒构建效率,以构建树干毕赤酵母Agglutinin-like基因的敲除载体为例,利用酿酒酵母活体细胞重组系统,一次性将多个外源DNA片段和线性化质粒重组,形成环状质粒。通过引物设计在相互连接的DNA片段之间引入50bp重叠序列,用PCR扩增DNA片段后,与线性化质粒一起转化酿酒酵母,再用PCR和测序等方法鉴定阳性酵母菌落中质粒的正确性。通过本方法构建的多片段质粒正确率高、耗时短。

摘要：表达序列标签(expressed sequence tags,EST)是开发SSR标记的重要资源。本研究从NCBI中大麻EST数据库中检索到1114个SSR,分布于989条EST序列中,占EST总数的7.66%。其中三、六核苷酸重复基元类型居多,分别占EST-SSR总数的39.84%和34.56%,统计得到三核苷酸重复类型47种,六核苷酸重复类型113种。利用部分EST-SSR序列设计49对SSR引物,其中40对引物有扩增产物,占所设计引物总数的81.63%。进一步用这些引物在24个大麻品种进行多态性检测,29对引物显示多态性,占可扩增引物的72.5%。利用E-7、E-8、E-11、E-18、E-21、E-39及E-48共7对引物构建了24份供试材料的SSR指纹图谱。本研究结果证明了基于大麻EST信息建立SSR标记是一种有效而又可行的方法,并且为这些品种的真伪鉴定和保护提供科学依据。

摘要：目的　优化抗毒酶基因纳米粒制备工艺 ,并对纳米粒部分性质进行研究。方法　用复凝聚法制备抗毒酶基因纳米粒 ,采用规格化的正交表安排试验 ,用SAS统计软件处理数据 ;用透射电镜观测纳米粒粒径和形态 ;用Pcs测定粒径和Zeta电位 ;用体外转染试验评价纳米粒的体外转染活性 ,用倒置显微镜观察转染结果。结果　正交设计试验结果表明 ,优化的抗毒酶基因纳米粒制备条件是 :壳聚糖浓度 30 0 μg·ml-1,丁酰胆碱酯酶基因质粒浓度 10 0 μg·ml-1,硫酸钠浓度 8mmol·L-1,pH值 5 .5 ,涡旋混合时间 30s。所制备的纳米粒在透射电镜下观察 ,结果表明 :绝大多数粒子的粒径在 10 0nm以下 ,粒径分布比较均匀。Pcs测定结果表明 :98%以上的粒子粒径分布在 5 0～ 10 0nm范围 ,与透射电镜结果相符 ;平均Zeta电位为 15 .9± 6 .3mV。体外基因转染试验表明 :纳米粒能将所包裹的基因递送到细胞内 ,并表达目标蛋白—丁酰胆碱酯酶。结论　壳聚糖浓度、质粒基因浓度以及它们之间的交互作用 ,在制备条件选择中具有决定性作用 ,丁酰胆碱酯酶基因 -壳聚糖纳米粒制备工艺可行 ,递送基因能力较强。本研究结果表明 :壳聚糖纳米粒作为基因递送载体具有广阔的发展空间。