摘要：目的建立特异、快速、灵敏的TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应（TaqMan—based Real—timePCR）用于西尼罗病毒（WNV）核酸检测，为WNV的感染诊断和流行病学监测奠定技术基础。方法根据文献公开发表的WNV核酸检测引物和TaqMan探针，优选最佳引物探针。应用DNAWorks2．4在线软件设计8条寡核苷酸片段，基于PCR合成包含引物探针扩增区域的230个核苷酸作为WNV模拟核酸。并对TaqMan-based Real—timePCR条件进行优化，验证该方法的特异性、灵敏度。结果该方法对WNV核酸检测有高度特异性，与流行性乙型脑炎、登革热1～4型等虫媒病毒均无交叉反应，对构建的DNA检测灵敏度达100拷贝／反应。结论TaqMan—based Real—timePCR是一种快速检测WNV特异、敏感的方法，适用于WNV的早期感染诊断和流行病学监测。

摘要：培训需求分析是指在规划与设计每项培训活动之前,采用各种方法与技术对培训对象的培训目标、知识、技能等进行系统的鉴别与分析,以确定是否需要培训及培训内容的一种活动或过程。

摘要：目的:建立Taq M an-MGB探针Real-tim e荧光PCR快速检测单增李斯特菌技术。方法:在对单增李斯特菌invA序列进行分析、比较基础上,设计一对特异性Taq M an-MGB探针法引物及探针,通过Real-tim ePCR反应条件和反应体系的优化,实现对单增李斯特菌的快速检测;用克隆到pMD18-T载体上的李斯特菌invA基因阳参片段及不同菌株、食品标本验证方法的特异性和敏感性。结果:方法的灵敏性高,其循环阈值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系,最低可检测57个拷贝数,经18 h增菌,可检测低至4.5 cfu/m l的细菌;特异性强,检测6株单增李斯特菌标准株和100株单增李斯特菌样品分离株的PCR循环域值(CT值)均小于25,而90株威氏李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌以及非李斯特菌PCR循环域值(CT值)大于35;快速,最快1 h可出结果,实际样品20 h可出结果,而常规细菌培养法需要一周以上;对103份速冻米面食品进行检测,13份阳性,与常规方法无显著性差异(P>0.05)。结论:Taq M an-MGB探针的单增李斯特菌Real-tim e荧光PCR检测方法具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,可推广应用。

摘要：目的:建立Taq Man-MGB探针实时荧光PCR检测金黄色葡萄球菌的方法。方法:在对金黄色葡萄球菌的基因序列进行分析、对比基础上,设计一对特异性引物及探针;通过对Taq Man-MGB探针实时荧光PCR反应条件和反应体系的优化,实现对金黄色葡萄球菌的快速检测;用金黄色葡萄球菌标准株、金黄色葡萄球菌分离菌株及铜绿假单胞菌、黄色微球菌、乙型溶血性链球菌、柠檬酸杆菌、白念珠菌、粪链球菌、表面葡萄球菌、英诺克李斯特菌、李斯特菌等其它菌种验证方法的敏感性、特异性和稳定性。结果:本方法的特异性极强,检测标准金黄色葡萄球菌和41株金黄色葡萄球菌分离株的循环域值(CT值)在17.3～28.7之间,均为阳性,而铜绿假单胞菌、黄色微球菌、乙型溶血性链球菌、柠檬酸杆菌、白念珠菌、粪链球菌、表皮葡萄球菌、英诺克李斯特菌等52株非金黄色葡萄球菌菌株均为阴性,CT值均大于34或扩增曲线为一平滑直线;经6 h增菌后,金黄色葡萄球菌的最低检测限为5.8 cfu/ml;纯菌1个半小时就可以出结果;连续6次重复试验,变异系数<3%。结论:本研究建立的金黄色葡萄球菌Taq Man-MGB探针实时荧光PCR方法具有灵敏度高、特意性强、快速、操作方便等特点。

摘要：目的:了解浙江省各级疾病预防控制机构实验室管理及工作人员对实验室生物安全知识的掌握情况,为更好地开展实验室生物安全管理和培训等相关工作提供依据。方法:统一设计《浙江省实验室生物安全知识调查问卷》,对全省11个市级疾病预防控制机构和随机抽取各市下属1个县级疾病预防控制机构实验室管理及工作人员进行实验室生物安全知识调查。结果:浙江省实验室工作人员总体知晓率为74.3%,但在实验室管理知识和专业知识的知晓程度上还是存在着参差不齐的现象,不同经济水平地区的得分悬殊有统计学差异,经济水平越发达、学历、职称越高、工作年限越长的人得分情况反而低。结论:加强对知晓率低的地区及人员生物安全知识和管理知识的培训,扩大实验室生物安全知识培训的覆盖面,不断提高实验室工作人员的安全防护意识。

摘要：目的建立快速、灵敏的TaqMan探针荧光逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)用于风疹病毒核酸的特异性检测。方法在风疹病毒非结构蛋白P150基因保守区域,设计特异性引物和TaqMan探针,优化荧光RT-PCR反应体系与反应条件,以提高方法的特异性和灵敏度,并应用于风疹疑似患者的临床样本检测。结果建立的荧光RT-PCR对风疹病毒检测具有高度特异性,对麻疹、流行性腮腺炎、流行性感冒等其他病毒均无交叉反应,且检测的灵敏度达0.01TCID5(050%组织培养感染剂量)/管。采用该方法从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右,且操作简便、重复性好、准确率高。结论建立的风疹病毒荧光RT-PCR高效、特异、敏感,为风疹病毒感染的早期快速检测提供了一种新的方法。