摘要：目的 设计、构建表达新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2) S1蛋白的重组杆状病毒,建立并优化其在昆虫细胞中的生产工艺,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)血清学诊断方法的建立及疫苗开发奠定基础。方法 利用分子克隆技术将S1基因插入pFastBac^(TM)1质粒,获得重组质粒pFastBac-S1,经转座获得重组杆粒rbacmid-S1,转染Sf9细胞后包装获得重组杆状病毒rBV-S1,通过rBV-S1感染High Five^(TM)(Hi5)细胞表达S1蛋白,使用Western blot分析鉴定S1蛋白的表达。在此基础上,建立优化rBV-S1扩增和蛋白表达的工艺,以实现S1蛋白的高效表达。结果 通过特异性引物PCR扩增重组质粒pFastBac-S1与重组杆粒rbacmid-S1,获得大小分别为2 367 bp、4 370 bp的基因片段,表明S1基因成功克隆入pFastBac^(TM)1质粒与bacmid;采用Western blot分析细胞培养上清液,在78 ku处有特异性反应条带,证明在昆虫细胞-杆状病毒表达载体系统(Insect cell-baculovirus expression vector system, IC-BEVS)中成功表达有反应原性的S1蛋白。Sf9细胞以1.5×10^(6)cells/mL接种,MOI=0.01接毒,96 hpi可收获最大病毒滴度为(8.40±0.16)lgTCID_(50)/mL;Hi5细胞以0.8×10^(6)cells/mL接种后培养36 h,以MOI=1接毒,48 hpi可获得最大S1蛋白产量为(4.33±0.09) mg/L。结论 利用IC-BEVS成功表达了S1蛋白,并建立了优化的S1蛋白生产工艺,实现了S1蛋白的高效表达,对COVID-19临床诊断方法的建立及疫苗开发具有重要意义。

摘要：文章介绍了按模板组卷型通用题库管理系统的总体结构、数据库设计和具体实现的方法,指出按模板组卷型通用题库管理系统可以克服传统题库管理系统存在的通用性和开放性差、组卷过分随机等问题。

摘要：文章开展了系列水性丙烯酸酯改性聚氨酯树脂(PUA)结构设计、聚合过程以及产物漆膜若干应用性能的研究工作,结构和工艺等重要参数对体系性能影响的规律性结论可对相关领域成膜聚合物产品的更新换代提供一定的实验数据.采用异佛尔酮二异氰酸酯(IPDI)、聚醚(PPG1000)、2,2–二羟甲基丙酸(DMPA)、甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)为原料,二月桂酸二丁基锡(T12)为催化剂,N,N-二甲基乙醇胺为中和剂,合成了含有不饱和双键的水性聚氨酯预聚体(WPU).以AIBN为引发剂,通过乳液聚合向WPU中引入甲基丙烯酸甲酯(MMA)和丙烯酸丁酯(BA),最终合成出性能优良的丙烯酸酯聚氨酯乳液(WPUA).乳液漆膜性能可达到吸水率5.54 wt%,附着力0级,抗冲击性50 kg·cm,硬度2H.