摘要：【目的】浙大瑞丰8是杭州瑞丰生物科技有限公司开发的抗虫转基因玉米,于2021年12月获得生产应用安全证书。研究浙大瑞丰8的特异性PCR检测方法,为市场监管和产业化推广提供技术支持。【方法】以浙大瑞丰8转化体外源基因插入端侧翼序列为靶标,在5'端(右侧翼)和3'端(左侧翼)分别设计特异性引物,以与玉米内标准基因zSSIIb一致的标准反应体系和反应程序,对左侧翼和右侧翼各20对引物进行了筛选,得到了特异性高、稳定性好的候选引物,通过改变退火温度和引物浓度这两个关键参数,初步建立了浙大瑞丰8转化体PCR检测方法。【结果】筛选到的浙大瑞丰8 PCR扩增引物RF 8-RB-R4/F1可特异性扩增目标片段265 bp,建立了与玉米内标准基因zSSIIb一致的标准反应体系和反应程序,实现了批量检测的高通量。【结论】建立的特异性定性PCR检测方法稳定性及适应性好,对拷贝数分数为0.1%(约20个拷贝)能稳定检出,可精准、特异地检测出浙大瑞丰8转化体。

摘要：GE-J12是中国农业科学院研发的转G2-EPSPS基因和GAT基因的抗除草剂大豆新品系。根据抗除草剂大豆GE-J12品系外源基因插入位点5’端转化体特异性序列设计引物和探针,经引物探针筛选、特异性测试、反应体系和程序优化、标准曲线构建、检测极限和定量极限测试等试验,建立了基于TaqMan水解探针的实时荧光定量PCR检测方法。该方法特异性强、准确度高,在RSD小于25%的情况下检测极限为0.032%,定量极限为0.16%,线性度大于0.992,经5%、3%和1%定值样品测试,与真实值平均偏差为2.87%-16.67%。可用于转基因耐除草剂大豆GE-J12转化体特异性序列含量的精准定量,为GE-J12大豆新品系的检测提供了新方法。