摘要：对硫化叶菌病毒(Sulfolobus virus)STSV2脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)基因进行克隆表达,并分析其酶学特征.根据STSV2的dUTPase基因序列设计特异性引物,以病毒STSV2 DNA为模板进行PCR扩增,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,然后,将其转化至Escherichia coli BL21(DE3)进行dUTPase的IPTG诱导表达及纯化,通过SDS-PAGE检测其大小,并测定其酶学活性.结果表明,诱导表达的重组dUTPase蛋白分子量(Mr)约为38×103(含pET32a(+)自带的助溶标签),重组dUTPase在Mg2+存在的情况下能特异性催化dUTP生成dUMP和PPi,其反应最适温度为60℃,在pH值3-8之间有较高的活性,其在提高PCR扩增效率和特异性方面具有一定的作用.本研究通过克隆表达获得了硫化叶菌病毒(Sulfolobus virus)STSV2脱氧尿苷焦磷酸酶,其在基因扩增领域有一定的应用价值.

摘要：Δ12-脂肪酸脱氢酶一般特异性催化在油酸的Δ12位引入双键转变成亚油酸.为了从粘红酵母YM25079中克隆全长Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列,参考已知的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列设计基因特异性引物,通过PCR扩增获得到全长为1 353 bp的cDNA序列,序列分析结果表明该序列具有一个编码450个氨基酸的完整开放阅读框,所编码蛋白质的大小为50.9×103.与报道的Δ12-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码Δ12-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证其功能,把开放阅读框序列亚克隆到表达载体pYES3/CT,构建重组表达载体pYRGD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达.脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,该序列所编码的蛋白质具有Δ12-脂肪酸脱氢酶活性,能将油酸转化为亚油酸,亚油酸的含量占酵母总脂肪酸的4.31%.以上结果表明,PCR所获得序列是新的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因.

摘要：Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成的关键酶.参考已知的Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增从红冬孢酵母YM25235中获得了全长为1 341 bp的一个cDNA序列.序列分析表明,该序列具有一个编码446个氨基酸、相对分子质量为50.6 ku的完整开放阅读框,所编码的氨基酸序列与Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶相似性最高但并不相同,而且也具有Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证功能,将该基因序列克隆到表达载体pYES3/CT中,构建重组质粒pY3RKD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVSCI中进行异源表达.通过脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,在pY3RKD12转化的酵母细胞总脂肪酸中出现一个保留时间和亚油酸甲酯标准品相同的新峰,其含量占酵母总脂肪酸的3.76%,但在pYES3/CT转化的酵母细胞总脂肪酸中没有检测到.这些结果证明所克隆的序列是一个新的Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因,其表达的蛋白质可催化油酸合成亚油酸.

摘要：环境监测是保障农作物茁壮生长的重要环节,本文介绍了基于阿里云的农业环境监控系统设计方法。该系统由设备端和阿里云物联网平台构成,设备端采用ARM微处理器作为主控芯片连接传感器以及继电器,同时连接ESP8266通信模块以MQTT协议与物联网平台进行数据交互。数据的存储、处理以及用户操作界面均在云端实现,用户可远程实时监测农作物生长环境并自动调节。结果表明,该系统开发任务量小,维护方便,系统的设计方法可广泛应用于工农业生产环境监测领域,提升自动化信息服务水平。

摘要：根据转录组测序结果设计特异性引物,以深黄被孢霉(Mortierella isabellina)M6-22的c DNA为模板,PCR扩增苹果酸脱氢酶基因MIMDH2,测序结果显示该序列长1 017 bp,编码338个氨基酸。序列分析表明该序列与已报道的烟曲霉(Aspergillus fumigates)线粒体苹果酸脱氢酶的相似性最高,达71.26%,且含有苹果酸脱氢酶的保守辅酶结合位点、底物结合位点和催化活性位点。将MIMDH2片段连接到表达载体pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a-MIMDH2,并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测结果显示在50 k D左右处有一蛋白质条带,酶活分析结果显示经镍柱亲和层析纯化的重组蛋白酶活高达271.33 U/mg。以上结果说明所克隆的MIMDH2为一个新的潜在的苹果酸脱氢酶基因,所编码的蛋白质具有苹果酸脱氢酶的活性。

摘要：为了实现鱼菜共生系统的自动化和智能化,本文设计了一种鱼菜共生智能监控系统。利用阿里云实现远程数据采集和设备控制,通过萤石摄像头实现远程实景监控和云台控制。通过改进AT通信程序,提高MCU和ESP8266之间AT通信的稳定性。基于养鱼和种菜的实际数据,设计模糊控制器规则,推理出当前最佳养殖方案,减少人工观测依赖度。实践证明,该系统的可靠性高,大大减少了人工管理成本。

摘要：本研究以分离自玉溪烤烟叶面的产淀粉酶菌株的基因组DNA为模板,设计特异性引物,通过PCR技术扩增出淀粉酶基因。将目的基因片断与表达载体质粒p ET30a连接,得到重组质粒而后转化到*** BL21(DE3),经菌落PCR检测阳性克隆。通过获得重组克隆菌株BL21-p ET,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白在大肠杆菌中高效表达及获得具有催化活性的重组淀粉酶。