摘要：目的运用实时定量PCR(Real-time PCR)检测结核分枝杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB、psts1、mpt64)的mRNA表达水平,探讨结核分枝杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1、mpt64及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64的实时定量PCR方法,并应用此方法检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1、mpt64的mRNA表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株的表达水平为0.36±0.13,两者有显著性差异(t=5.683,P0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的实时定量检测方法,检测显示耐异烟肼菌株的fbpB、psts1基因的mRNA表达水平显著高于敏感菌株,可能为耐异烟肼MTB的实验室诊断提供分子标识。

摘要：目的运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值。方法根据Genbank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法。选用46株结核分枝杆菌临床分离株,以及2株非结核分枝杆菌。应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv国际标准株fbpB、psts1、mpt64基因的表达水平。结果结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号;耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,P<0.01;t=2.545,P<0.05),北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。结论有统计学意义(t=2.567,P<0.05;t=2.373,P<0.05)。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR检测方法,该方法可以快速判断活菌与死菌。检测发现耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株;北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。

摘要：目的运用实时定量qPCR(quantitative real-ti me PCR)检测结核分支杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B和38 ku蛋白编码基因(fbpB、psts1)的表达水平,分析结核分支杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-Tsi mple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用实时定量PCR检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1的表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株fbpB表达水平为0.36±0.13,差异有统计学意义(t=5.683,P<0.01);耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株psts1表达水平为9.86±2.79,差异有统计学意义(t=3.869,P<0.01)。结论应用实时定量PCR检测耐异烟肼菌株的fbpB、psts1的表达水平显著高于敏感菌株,为耐药结核的实验室诊断提供分子标识。