摘要：以高湿挤压纤维化大豆蛋白仿真鸡肉为原料,添加一定量香辛料,通过卤制、腌制和烘烤等工序开发仿真熟鸡肉产品。结果表明:通过感官评价和正交实验及中心组合实验确定最佳配方如下:咖喱粉3%,白糖1%,食盐3%。烘烤温度为120℃,烘烤时间为15 min。在整个二次加工过程中,蛋白质损失率2.60%,产品的损失率10.2%,氨基酸含量明显高于鸡肉。该研究结果为大豆深加工提供一条新的途径和方法,为其他仿真肉的开发提供参考。

摘要：为建立特异、快速检测空肠弯曲菌的方法，本研究针对其gyrA基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO），建立了空肠弯曲菌DPO-PCR检测方法。试验结果显示，该方法的检测下限为1．2×10^2cfu／mL，在48℃～68℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中不会产生非特异性扩增。利用该方法对采集的184份样品进行检测，共计检出17份空肠弯曲菌阳性样品，经国标法（GB/T 4789．9-2008）复验，两者检测结果一致，显示了良好的实用性。该DPO-PCR方法设计简单、特异性强，为致病微生物的快速准确检测提供了新方法。

摘要：本研究利用一种高特异性PCR引物设计方法——双启动寡核苷酸引物（dual-primingoligonucleotide，DPO），以志贺氏菌属侵袭性质粒抗原（ipaH）基因为靶基因，设计DPO引物，建立了特异性检测志贺氏菌属的DPO—PCR方法。结果显不，所建立的DPO-PCR方法检测灵敏度为1．65×10^2CFU／mL；与常规PCR引物相比，DPO引物设计简易，简化了PCR引物设计；DPO引物退火温度范围宽，在50-70℃退火温度内均可对靶基因进行高效扩增；DPO引物结构特殊，具有比常规PCR引物更高的特异性，反应中无非特异性扩增产生。实践检测结果显示，利用该方法对133份冻／鲜肉类、果蔬类、鲜牛奶、鸡蛋和熟食样本进行检测，共检出15份志贺氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．5-2012）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性和可靠性，为志贺氏菌快速、准确的检测提供了新手段。

摘要：采用一种新型的引物设计方法——双启动寡核苷酸引物(dual-priming oligonucleotide,DPO),以霍乱弧菌mdh基因为靶序列,建立了霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法,分析了DPO引物退火温度不敏感性、检测灵敏度及特异性,并对检测方法进行了初步应用。灵敏度结果显示,DPO-PCR方法对霍乱弧菌的最低检出限为1.07×102 CFU/mL。退火温度不敏感性试验中,与常规PCR引物相比,DPO引物在45～65℃退火温度均能够高效扩增出靶基因片段。特异性结果显示,DPO-PCR方法的特异性比常规PCR方法强,不产生任何非特异性扩增。利用建立的霍乱弧菌DPO-PCR检测方法对采集的550份样本进行检测,检出43份霍乱弧菌阳性样本,经行业标准法(SN/T2425-2010)复检,检测结果相同,表明所建立的DPO-PCR检测方法具有良好的实用性,为霍乱弧菌的快速准确检测提供了新途径。

摘要：以单核细胞增生李斯特氏菌iap基因为靶基因，利用一新型PCR引物设计方法——双启动引物（Dual-primingoligonucleotide，DPO），建立了特异性检测单核细胞增生李斯特氏菌的DPO—PCR方法，测试了DPO—PCR方法退火温度不敏感性、特异性及灵敏度，并在实践检测中进行了初步应用。结果显示：该方法检测单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度为1．51×10^2CFU／mL；退火温度不敏感性测试中，与常规PCR引物相比，DPO引物在48～68℃退火温度范围内均能够高效率地扩增靶基因；特异性测试中，DPO—PCR方法能特异地检测出目标菌，与其他菌株无非特异性扩增反应，比常规PCR方法显示出更强的特异性。实践应用证明，利用DPO—PCR方法对130份样本进行检测，共计检出9份单核细胞增生李斯特氏菌阳性样本，经国标法（GB／T4789．30—2008）复检，两者检测结果一致，显示出良好的实用性，为单核细胞增生李斯特氏菌的快速准确检测提供了新方法。

摘要：为了准确、高效地检出番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV),利用双启动寡核苷酸引物(DPO)技术,以TSWV外壳蛋白(CP)基因为靶基因,设计了一对DPO引物,对PCR反应体系中的引物、d NTPs、Taq DNA聚合酶用量进行优化,建立了TSWV的DPO-PCR检测方法,并对其灵敏度、特异性以及退火温度敏感性进行了评价。结果表明,应用DPO引物建立的PCR技术能够成功地扩增出TSWV的208 bp特异性条带,与预期目标相符。经过优化后,DPO-PCR反应体系(25μL)为:DNA模板1μL,10×Buffer(含Mg2+)2.5μL,d NTPs(每种2.5 mmol/L)2.0μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.2μL,上、下游DPO引物(20μmol/L)各1.0μL,以去离子水补充至25μL。利用该检测方法,在49.8~70.0℃的退火温度范围内,均可实现目标基因片段的高效扩增,说明其对退火温度不敏感;利用病毒RNA进行检测,该方法的灵敏度为7.5 ng;通过对TSWV、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和番茄黑环病毒的检测表明,仅TSWV呈现阳性反应,说明该方法特异性强。所建立的DPO-PCR检测方法能够准确、高效地检测TSWV,可用于进出境种苗检疫筛查及田间病害诊断。