摘要：《动物试验设计》课程是动物科学类专业重要的专业基础课程。在分析该课程教学现状、存在问题的基础上,通过优化教学内容,加强实践环节,采用案例式、启发式(项目式)、研讨式等灵活多样的教学方法与手段,同时创新多阶段、多形式的考核评价体系,提高了教学效果和教学质量,为农业院校《动物试验设计》课程教学提供了经验。

摘要：动物试验耗时长、成本高,还会涉及到动物福利的问题,因此在试验设计过程中需要准确估计动物试验所需的样本含量,以便使用尽可能少的试验动物达到试验目的。不同试验设计的样本含量估计方法不同,但各种试验设计都可以根据其试验类型凝炼出一个关键问题并使用简化方法来估计样本含量。本文则着重针对不同的试验类型介绍一些动物试验样本含量估计的简化方法,以便研究者能够相对准确地确定试验所需的样本含量。

摘要：在家禽试验中经常会需要对试验动物进行连续性观察而获得重复测量数据。对这类数据资料如果采用常规方差分析或者对重复测量数据的各时间点分别分析,其结果可能因为来自相同个体的多次观察数据间存在相关而加大误差,或无法充分反应数据连续观测的特性。针对动物试验中重复测量数据的统计方法,文章分析了重复测量数据的重复测量方差分析(RM-ANOVA)、多变量方差分析(MANOVA)法以及混合线性模型拟合法的适用条件,结合案例详述了如何选择合适的方法在R语言中实现对这类数据的分析,为家禽科学及相关专业涉及重复测量数据的统计分析提供参考。

摘要：高原低氧环境模拟有两种方式:一是低压低氧模拟,一是常压低氧模拟.低压模拟是通过抽气使舱内气压降低.氧分压也随之降低;这是航天医学研究常用手段.构建一个大型低压氧舱的投资和维持费用甚高,非一般单位所能及.常压低氧模拟是通过降低舱内氧气浓度来降低氧分压,这是国内外众多实验室进行低氧生理、病理和遗传机理研究的常用手段之一.常压低氧模拟常用持续灌注混合气体的方式,气体耗费很高,且取样分析O2和CO2浓度工作强度大;尤其是动物呼吸、室外环境等因素变化使得舱内气体浓度、温度和湿度的控制更加复杂.近年来,出现了利用单片机控制气路来调控气体浓度的饲养舱(Eddahibi,1997;种银保等,2002),为低氧模拟提供了较好的方式.但这些低氧舱是针对实验动物饲养环境设计的,其温度、湿度等达不到禽蛋孵化的要求,更无翻蛋设备.

摘要：针对低温工况下多能互补供暖系统的工作性能和经济性较差等问题,文章设计了太阳能-蓄热空气源热泵互补供暖系统,该系统在传统太阳能-空气源热泵互补供暖系统的基础上增加了蓄热装置,提高了空气源热泵入口的空气温度。文章基于TRNSYS软件构建了太阳能-蓄热空气源热泵互补供暖系统的仿真模型,并分析了空气源热泵制热能效比的变化,对比了入口处有、无蓄热装置时太阳能-蓄热空气源热泵互补供暖系统的热性能和经济性。分析结果表明:在增设蓄热装置后,空气源热泵的平均制热能效比提高了34.87%;在供暖期内,系统的平均代价火用效率提高了3.24%,总能耗减少了2×10^(7) kJ,费用年值与太阳能保证率之比ACSF减少了3.3元;系统中各部件的火用效率均有所提高,空气源热泵工作性能的改善最为显著,火用效率提高了4.63%。

摘要：在哺乳动物细胞中,利用同源引导修复(homology-directed repair,HDR)机制的基因编辑策略能够实现精准的点编辑和敲入,但是HDR的低效性严重制约了该策略在精准医疗和分子设计育种中的应用。鉴于HDR机制所需的供体DNA模板不能自主募集到基因组双链断裂(double-stranded break,DSB)处,本课题组提出了供体适配系统(donor adapting system,DAS)的概念并开发出CRISPR/SpCas9-Gal4BD供体适配基因编辑系统。由于SpCas9蛋白分子较大,与Gal4BD适配器结合不利于表达、病毒载体包装及活体递送等过程,因此本研究进一步采用两种小型化Cas蛋白——路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)源SlugCas9变体SlugCas9-HF与氨基酸球菌(Acidaminococcus sp.)源AsCas12a,开发了新型的CRISPR/Gal4BD-SlugCas9和CRISPR/Gal4BD-AsCas12a供体适配基因编辑系统。通过SSA活性报告实验初步证明了Gal4BD与SlugCas9、AsCas12a N-端融合对其打靶活性影响较小。通过HDR效率报告实验进行功能验证并优化供体设计方案,结果表明:对于CRISPR/Gal4BD-AsCas12a DAS,适配器结合序列(binding sequence,BS)与供体5′-端融合(BS-dsDNA)效果较好;对于CRISPR/Gal4BD-SlugCas9 DAS,则BS与供体3′-端融合(dsDNA-BS)较佳。最终,利用CRISPR/Gal4BD-SlugCas9 DAS对HEK293T细胞中的EMX1、NUDT5、AAVS1三个基因位点分别实现了24%、37%、31%的精准编辑,相比对照组得到了显著提高。本研究为供体适配基因编辑系统的进一步优化提供了参考和借鉴,为后续动物分子设计育种应用研究提供了新的基因编辑工具。

摘要：为了在鸡基因组上对AMHR2基因进行精确编辑,该研究利用***:807网站设计并通过PCR退火拟合获得成对的AMHR2基因靶位点,将靶位点分别整合进pX330-U6-Chimeric_dBsa I-CBh-hSpCas9载体骨架,构建靶向AMHR2基因的成对CRISPR/Cas9敲除载体。将包含成对靶位点的DNA序列整合进pB-CMV-DsRed-CAG-Chimeric.200 bp ***-T2A-GFP载体骨架,构建与敲除载体对应的双荧光报告载体。载体测序鉴定正确后分别共转染HEK293T细胞与鸡DF-1细胞,通过细胞荧光粗略判断CRISPR/Cas9系统是否工作。随后,利用Puromycin对基因编辑阳性的DF-1细胞进行药物筛选富集,提取细胞基因组进行TA克隆,进一步检测CRISPR/Cas9系统的工作效率。结果表明靶向鸡AMHR2基因的CRISPR/Cas9敲除系统构建成功,且成对靶位点敲除系统的工作效率高于单一靶位点敲除系统,CRISPR/Cas9敲除系统在DF-1细胞基因组上对AMHR2基因的敲除效率约为60.0%,并在鸡DF-1细胞基因组上实现了AMHR2基因的精确编辑。

摘要：近年来,CRISPR基因编辑及衍生技术迅速发展,在生命科学、生物医学研究以及动植物育种领域得到了广泛应用。基于DNA双链断裂(double-stranded break,DSB)同源指导修复(homology-directed repair,HDR)机制的基因敲入和点编辑是基因编辑的重要策略,但效率偏低亟待提高。本文提出了驱动供体DNA富集至DSB处以提高HDR效率的新策略,并设计了一套CRISPR/Cas9-Gal4BD供体适配基因编辑系统(donor adapting system,DAS)。该系统主要利用Gal4 DNA结合域(Gal4 binding domain,Gal4BD)作为配体蛋白与Cas9融合表达,将Gal4BD结合序列(Gal4 binding sequence,Gal4BS)作为受体序列与双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)供体结合,以期提高HDR效率。使用***报告细胞系的初步研究结果表明当dsDNA供体同源臂在一定长度(100~60 bp)时该系统能够提高HDR效率2~4倍。进一步的优化研究表明,融合端口和融合使用连接子(linker)的选择会影响Cas9表达效果及活性,而GGS5作为Cas9-Gal4BD融合的连接子则影响较小。同时,本研究还发现Gal4BS-dsDNA供体的差异化设计也会影响HDR效率,将Gal4BS添加到dsDNA供体5′-端的效果最佳。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9-Gal4BD DAS在AAVS1和EMX1位点上实现了HDR编辑效率的提高,为进一步利用该系统进行动物分子设计育种研究提供了参考和借鉴。