摘要：核酶作为一种特异性抑制转录后基因表达的遗传操作工具 ,已在基因治疗和后基因组研究领域显示出其巨大的应用价值。目前 ,人们正致力于提高核酶在体内的活性 ,以及寻找新的更有价值的核酶结构。本文就在核酶的设计 目标剪切位点的选择 促进核酶剪切活性的额外因子 用体外筛选方法获得新型核酶。

摘要：目的　探讨核酶 (RZ)在细胞水平调节雄激素受体 (AR)基因表达的作用。方法　设计并合成针对AR的锤头状核酶序列 ,分子克隆技术构建活性核酶和无活性核酶表达载体 ,脂质体介导下转染雄激素受体表达阳性细胞株T47D。转染第 1～ 3天 ,应用免疫组织化学和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测细胞内AR基因表达水平。结果　AR活性核酶表达载体转染后 ,T47D细胞ARmRNA水平降低 2 2 .4%～ 50 .7% (P 0 .0 5)。结论　成功构建AR锤头状核酶表达载体 ,能特异性切割ARmRNA 。

摘要：目的检测抗凋亡因子 XIAP 与 PED/PEA-15在前列腺癌细胞(PC-3)中的表达,探讨二者对前列腺癌细胞凋亡的影响。方法应用半定量 RT-PCR 法检测前列腺癌细胞(PC-3)中PED/PEA-15和 XIAP 的表达。设计并构建 PED/PEA-15和 XIAP 特异的 siRNA 载体,以脂质体法转染二者的 siRNA 载体至前列腺癌细胞(PC-3)中,半定量 RT-PCR 法检测特异 siRNA 载体对PED/PEA-15和 XIAP 转录的影响:光镜观察细胞形态改变;流式细胞法检测细胞凋亡的变化。结果半定量 RT-PCR 显示 PED/PEA-15和 XIAP 均在前列腺癌细胞(PC-3)中高表达。酶切和 DNA测序证实 XIAP 和 PED/PEA-15 siRNA 载体构建成功。共转染 XIAP 和 PED/PEA-15 siRNA 载体人 PC-3细胞,可导致 XIAP 和 PED/PEA-15的转录抑制,并增加 PC-3细胞对阿霉素的敏感性,凋亡明显增加,处理组凋亡率为79%,对照组为46%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PED/PEA-15和 XIAP 在前列腺癌的凋亡中可起重要作用。

摘要：目的　探讨反义技术阻断雄激素受体 (AR)基因表达对前列腺癌细胞生长的影响。　方法　设计、合成针对AR基因反义寡核苷酸 (ASODN) ,在脂质体介导下转染前列腺癌细胞。采用RT PCR方法检测AR基因表达 ;MTT比色法检测细胞增殖活性 ;透射电镜、TUNEL检测细胞凋亡 ;流式细胞术分析细胞周期时相。　结果　 0 .5～ 2 .0 μmol LASODN作用 12～ 36h ,癌细胞ARmRNA水平降低 10 .45 %～ 82 .10 %(P <0 .0 5 ) ,细胞增殖活性抑制 11.8%～ 5 6 .9%(P <0 .0 5 ) ,细胞周期阻滞于G2 M期 ,部分细胞呈现典型凋亡形态学改变 ,凋亡比率为 34.2 5 %(P <0 .0 1)。　结论　应用ASODN封闭AR基因表达能抑制前列腺癌细胞体外生长活性 ,有望成为前列腺癌基因治疗的有效策略。

摘要：目的　研究锤头状核酶对雄激素受体 (AR)mRNA片段的体外切割活性 ,探讨抗雄激素基因治疗的新途径。方法　计算机模拟ARmRNA片段二级结构 ,选择第 10 18位GUC为核酶切割位点 ,设计特异性切割AR的锤头状核酶 (RZ) ,合成含T7启动子的核酶和底物模板链 ,体外转录RNA ,37℃条件下行核酶体外切割反应。结果　核酶在体外 37℃反应 1h ,可将 98%的底物RNA ( 2 5 5nt)切割为 16 8nt和 87nt2个片段。结论　特异性切割AR的锤头状核酶在体外对底物RNA有良好的切割活性 ,为应用核酶阻断雄激素受体基因表达奠定了基础。

摘要：目的　探讨反义技术阻断人类端粒酶催化亚单位 (hTRT)基因表达对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法　设计、合成异硫氰酸荧光素标记的hTRT基因反义寡核苷酸 (ASODN) ,在脂质体介导下转染前列腺癌细胞系PC3 M ,运用荧光显微镜观察ASODN在癌细胞内的分布 ,MTT比色分析、流式细胞仪、克隆形成实验检测癌细胞体外生长活性 ,RT PCR和PCR ELISA法检测hTRT基因表达及端粒酶活性。结果　 0 5～ 2 0 μmol/LASODN转染 12～ 36h后 ,ASODN逐渐聚集于细胞核 ,PC3 M细胞增殖活性抑制 34 1%～ 79 6 % (P <0 0 1) ,细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,克隆形成能力抑制 6 1 2 6 % (P <0 0 1) ,hTRTmRNA水平降低 2 4 4 8%～ 86 73% (P <0 0 1) ,端粒酶活性抑制 2 4 74 %～ 76 72 % (P <0 0 1)。结论　运用ASODN阻断hTRT基因表达 ,降低端粒酶活性 。

摘要：目的检测人前列腺癌细胞(PC-3M)中Omi／HtrA2的表达情况,并构建其小干扰 RNA(siRNA)表达载体,探讨Omi／HtrA2对PC-3M凋亡的影响。方法以细胞免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Omi／HtrA2在前列腺癌细胞系(PC-3M)和正常前列腺细胞中的表达。利用软件辅助设计Omi／HtrA2特异性siRNA序列,体外合成后将其克隆入真核表达载体 psiRNA-hHlneo。以脂质体法转染psiRNA-Omi／HtrA2载体至PC-3M中,以RT-PCR和Western blot法检测psiRNA-Omi／HtrA2对Omi／HtrA2转录和表达的沉默效应。用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞法检测siRNA导致Omi／HtrA2基因沉默后,PC-3M细胞凋亡的变化。结果细胞免疫组织化学和RT-PCR均显示Omi／HtrA2在PC-3M细胞中高表达。酶切和DNA测序证实合成的siR- NA基因序列正确,并已被准确克隆入psiRNA-hHlneo载体中。psiRNA-Omi／HtrA2载体可特异性抑制PC-3M细胞中Omi／HtrA2的表达。转染psiRNA-Omi／HtrA2载体的PC-3M细胞凋亡下调。结论促凋亡因子Omi／HtrA2可导致前列腺癌细胞凋亡,Omi／HtrA2的表达对前列腺癌的发展有重要作用。

摘要：设计针对增殖细胞核抗原(PCNA)基因的特异性反义寡核苷酸(PCNA-ASO)可抑制人胃癌不同细胞系增殖,而对正常细胞生长则无影响[1].本研究旨在探讨PCNA-ASO对人膀胱癌EJ细胞、人结肠癌HCT-8细胞、人肺癌GLC-82细胞、人恶性胶质瘤BT-325细胞体外增殖活性的影响及作用的敏感性.

摘要：1998年1月～2002年1月,我院收治先天性尿道下裂患者72例,其中对8例阴囊发育较好的阴囊及会阴型下裂患者采用自行设计的阴囊原位皮管与带蒂岛状皮瓣皮管联合皮管法进行矫治,效果良好,现报告如下.

摘要：我们选择鼠端粒酶RNA(mTR) 模板区序列设计的反义寡核苷酸(ASODN)作用于体外分离纯化的SD大鼠精原细胞,观察mTR ASODN对精原细胞生理状态下合理存在的端粒酶活性的影响,为临床更安全的肿瘤基因治疗及端粒酶途径的男性生殖调控提供依据。