摘要：背景Leber遗传性视神经病变（LHON）与视神经炎的病因和治疗方法均不相同，但由于其临床表现相似，因此易被误诊。利用实时荧光定量PCR技术建立一种高通量、简便、快速、特异性高的LHON检测方法具有重要的临床意义。目的建立以实时荧光定量突变特异性Taqman探针技术检测LHON线粒体DNA（mtDNA）11778G〉A突变的方法，实现快速、简便、准确地筛查mtDNA11778位点突变LHON患者。方法根据mtDNA全基因组序列设计针对mtDNA11778G〉A突变的特异性Taqman探针和引物，从河南省眼科研究所分子生物室LHONDNA库任意选取标本84份，另抽取40名18～20岁健康体检者的血样40份作为正常对照，分别用实时荧光定量特异性探针法和序列测定法检测LHONmtDNA11778G〉A突变，并对检测方法进行可靠性验证。结果用实时荧光定量Taqman探针法检测mtDNA11778G〉A突变，84例视神经病变患者中发现mtDNA11778G〉A突变者23例，阴性结果者61例，23例阳性患者样本扩增曲线结果显示ct值为22．993±0．708，正常对照组样本ct值均为0，与直接测序法检测结果完全相符，其符合率为100％，未发现假阳性和假阴性结果者。结论用实时荧光定量突变特异性Taqman探针法检测LHONmtDNA11778G〉A突变位点的方法简单、省时、准确、直观、特异性强、敏感度高，适用于对LHONmtDNA11778G〉A突变的大规模筛查或预防性检查。

摘要：目的：运用多重巢式PCR技术，同步检测人组织中的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒，为角膜移植供体组织材料中乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的快速筛查建立方法。方法。参照相关文献和Genbank公布的乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒全基因序列，分别设计并合成乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的半巢式和巢式引物。供体角膜周边组织材料2份，由河南省眼科研究所眼库提供。角膜供体年龄为18～45岁。以上角膜材料均由河南省各地、市级医院送来，供体人员生前是否患有乙型肝炎和／或丙型肝炎均情况不明。在得到角膜周边组织材料后，每份迅速切取10mg左右置于无茵研磨器内研磨，用一步法快速提取基因组DNA和总RNA。首次完成丙型肝炎病毒的反转录cDNA，然后在同一反应体系内同时加入乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒引物，采用“双退火温度”，共35个循环，进行两轮巢式扩增。结果：在32份样本中，乙型肝炎病毒阳性为3份（阳性率9．3％）；丙型肝炎病毒均为阴性（阳性率0％）。结论：从角膜周边组织中提取基因并用于乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的组织快检，可扩大用于角膜移植材料的来源。运用多重巢式PCR技术对角膜供体材料中DNA和RNA的组织快检，具有方法简便、灵敏度高、出结果快、经济等优点，具有推广应用价值。

摘要：目的:分析中国人Leber遗传性视神经病变14484位点突变的频谱及其遗传特征。方法:针对57例疑似LHON 14484位点突变的患者设计引物进行PCR扩增,PCR产物用限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)并联合DNA测序的方法进行分析。同时选取20例正常健康成人作为对照。结果:57例LHON疑似14484位点突变者中,确诊9例为14484位点突变,占15.8%。其中2例单纯性14484位点突变,占22.2%;3例14484位点联合14502位点突变,占33.3%;3例14484位点联合14470位点突变,占33.3%;1例14484位点联合14569位点突变,占11.1%。对照组正常健康成人测序结果均为正常序列。结论:中国人线粒体LHON14484原发性位点突变中,存在与其他继发性位点联合致病的倾向,其中以14484+14502和14484+14470这两个突变位点为主。