摘要：目的评估线粒体分裂蛋白1(Fis1)在甲基苯丙胺(METH)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤中的作用。方法采用成组设计方法,将体外培养SH-SY5Y细胞分为不同组别:未沉默组、沉默阴性组和沉默组,不同浓度的METH诱导各组SH-SY5Y细胞24 h。利用Western blot检测Fis1蛋白表达水平,使用CCK-8细胞毒性增殖实验分析METH对SH-SY5Y细胞增殖能力的影响,利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测METH对SH-SY5Y细胞MMP水平的影响,使用透射电镜观察METH对SH-SY5Y细胞线粒体超微结构的影响。结果未沉默组、沉默阴性组和沉默组中,与对照组比较,各组组内随METH诱导SH-SY5Y细胞的浓度升高,Fis1蛋白表达水平升高(P<0.05)、增殖能力减弱(P<0.05)、MMP水平降低(P<0.05);与未沉默组和沉默阴性组相同浓度比较,沉默组SH-SY5Y细胞Fis1蛋白表达水平降低(P<0.05),增殖能力增强(P<0.05),MMP水平升高(P<0.05)。组内与对照组比较,2.0mmol·L^-1 METH诱导未沉默组、沉默阴性组和沉默组,透射电镜观察见线粒体小球状结构增多(P<0.01)。结论Fis1可能在METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞损伤中起关键作用。

摘要：目的 研究沉默线粒体分裂蛋白1（Fis1）对人脑神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y细胞）Fis1、线粒体融合蛋白1（Mfn1）及线粒体膜电位水平的影响，并进一步探讨线粒体融合分裂在慢性氟中毒发病机制中的作用。方法 体外培养SH-SY5Y细胞，待细胞贴壁生长进入对数增长期时进行实验，采用成组设计将细胞分为未染氟空白对照组、染氟组［2 mmol／L氟化钠（NaF）］、染氟阴性对照组［2 mmol／L NaF ＋ 非特异性小干扰RNA（siRNA）］、沉默组（2 mmol／L NaF ＋ siRNA-Fis1）。蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中Fis1和Mfn1蛋白表达水平；实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测Fis1和Mfn1 mRNA表达水平；线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位水平。结果 与空白对照组（1.37 ± 0.18、1.00 ± 0.04，1.57 ± 0.19、1.00 ± 0.04，1.00 ± 0.10）比较，染氟组Fis1蛋白（1.72 ± 0.04）及mRNA表达水平（1.48 ± 0.13）均升高，Mfn1蛋白（0.87 ± 0.02）及mRNA表达水平（0.69 ± 0.07）均降低，线粒体膜电位水平（0.76 ± 0.13）降低（P均 〈 0.05）。与空白对照组比较，沉默组Fis1蛋白（0.79 ± 0.07）及mRNA表达水平（0.06 ± 0.03）均降低，Mfn1蛋白（1.71 ± 0.04）及mRNA表达水平（1.52 ± 0.05）均升高（P均 〈 0.05），线粒体膜电位水平（0.94 ± 0.01）有降低趋势。与染氟组比较，沉默组Fis1蛋白及mRNA表达水平均降低，Mfn1蛋白及mRNA表达水平均升高，线粒体膜电位水平升高（P均 〈 0.05）。结论 人工抑制Fis1基因表达水平可降低氟致SH-SY5Y细胞的线粒体分裂和线粒体膜电位损伤。