摘要：为建立一种快速且同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)的方法,本研究根据GenBank中PCV2和PCV3的全基因组序列,设计了两对特异性引物,通过对扩增条件的优化,建立了能够同时检测PCV2和PCV3的双重PCR方法。该方法可以同时扩增PCV2的266 bp和PCV3的594 bp特异性片段,而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的基因组扩增结果均为阴性。对PCV2和PCV3的最低检出量均为100拷贝/μL。对广西境内100份健康屠宰猪淋巴结样品检测结果显示,单一PCR与双重PCR检测符合率为100%。结果表明,本研究建立了一种简便快捷、反应灵敏、稳定可靠且特异性强的双重PCR技术,为临床样品中PCV2和PCV3的快速检测提供了有效的技术支持。

摘要：2005～2007年在海南省东方市新龙镇已失管5a的腰果无性系FL30果园进行施肥管理,开展NPKL9(34)正交设计施肥试验,研究施肥对植株恢复生长和增产效果的影响。结果表明:氮磷钾肥配施明显地促进植株恢复生长和提高腰果产量;初花期和盛花坐果期,氮素是影响腰果产量的重要营养元素,试验第1,2年植株叶片氮素含量与腰果产量分别呈现直线极显著正相关和直线显著正相关;在低氮条件下,施磷钾肥的增产效果不明显。

摘要：在自然环境下对5个腰果无性系果实的图像进行了识别研究,得出腰果果实图像识别的组合算法设计。该组合算法设计是首选对原始图像进行双边滤波,选用Lab颜色空间模型,采用OTSU算法进行粗分割,对红色系果实图像选择a通道作为分割通道,对于黄色系果实图像将a通道和L通道的分割图像做代数乘法运算,对残留背景较多的粗分割图像采用K-means算法做精细分割,分割完成后进行连通域分析和圆盘均值滤波,将面积最大的连通域作为目标区域,完成识别。结果表明,在粗分割阶段,CP63-36、GA63、HL2-13和HL2-21果实图像中大部分背景被去除,只残留零星噪声部分,而FL30的粗分割图像残留背景较多,需做精细分割,其精细分割图像中残留背景较少。通过连通域分析和滤波,所有腰果无性系的果实图像都被完整地识别出来。研究表明,该组合算法设计能从自然环境图像中准确有效地识别出腰果果实。

摘要：参考GenBank上发表的猪星状病毒亚基因组序列,设计1对引物,对猪星状病毒广西流行株衣壳蛋白ORF2基因进行扩增,最终克隆得到PAstV/NNJG7株的衣壳蛋白完整序列。序列分析发现,其ORF2全长2 358bp,编码786个氨基酸;与猪星状病毒Ⅰ型参考株核苷酸同源性最高,为77.3%～79.4%;在ORF1b和ORF2连接处有一段高度保守的序列,在ORF2 3′端有一段长83bp非翻译序列及一个含43bp高度保守的茎环样基序。本试验不仅丰富了猪星状病毒衣壳蛋白基因序列,也为基因疫苗和诊断试剂盒的研制提供材料及理论依据。

摘要：为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测。研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×10^8copies/μL^2.92×10^2copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26%~1.57%之间。该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL。使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42%,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染。本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测。

摘要：采用L18(37)正交设计,探讨氮、磷、钾、镁、硼肥配施对EksotikaⅡ品种番木瓜(Carica papaya Linnaeus)植株叶柄养分含量的影响。结果表明:施氮肥对植株叶柄含氮量的影响最大,其次为施磷、钾和硼肥,施镁肥则影响最小;施氮肥能明显提高叶柄中的含氮量,但当施氮量达35 g/株.次时,效果不显著;施磷、钾肥有降低叶柄中含氮量的趋势。施磷肥对植株叶柄含磷量的影响最大,其次为施镁和钾肥,施硼和氮肥的影响最小,磷肥、硼肥施用量与叶柄中含磷量之间无明显的变化规律。施钾和镁肥对植株叶柄含钾量的影响最大,其次为施磷肥,施氮肥和硼肥的影响最小;在施钾肥25～45 g/株.次的范围内,能显著提高植株叶柄中的含钾量。施氮和钾肥对植株叶柄含镁量的影响最大,其次为施镁肥和磷肥,施硼肥的影响最小;施氮肥能提高叶柄中的含镁量,但当施氮量达35 g/株.次时,增量已不显著;施钾肥有降低叶柄含镁量的趋势,当施肥量达45 g/株.次时,叶柄中的含镁量显著下降。施镁肥对植株叶柄含硼量的影响最大,其次为施磷肥,施氮肥、硼肥和钾肥的影响最小;施磷肥15、25 g/株.次时,叶柄中的含硼量相同,但当施用量达35 g/株.次时,叶柄中的含硼量则显著上升。镁肥施用量不宜过大,当施用量≥0.53 g/株.次时,会造成叶柄中的氮、磷、钾、镁、硼含量下降。

摘要：采用L9（3^4）正交设计，探讨氮、磷、钾肥配施对幼龄腰果植株生长和结果的影响。试验结果表明，对于2龄腰果植株，最佳施肥组合为N1P1K1，年施氮（N）150g／株、磷（P2O5）50g/株和钾（k2O）50g／株处理，可以促进植株生长；对于3龄腰果植株，年施氮250～450g/株处理，植株的冠幅、株高增量随着氮施用量增加而增大，磷、钾影响不显著；现蕾期和初花期，P2O5 90g／株和K2O 200g／株处理的植株现蕾、开花枝梢比例最高，施氮影响不显著；盛花坐果期，施N 350g/株、P2O5 150g／株和K2O 150g／株处理的植株现蕾开花枝梢比例最高。氮和钾对3龄植株结果影响较大，年施N 250～450g／株处理，平均株产量随着氮施用量的增加而增加，最佳施肥组合为N3P1K2，施N 450g／株、P2O5 90g／株和K2O 150g／株处理，可以促进3龄腰果植株结果。3龄植株腰果产量与初花期叶片钾（K）含量（0．43％～0．47％）和盛花坐果期叶片N含量（1．89％～2．20％）呈直线显著正相关。

摘要：为了建立特异、灵敏及快速的猪星状病毒3型(PAstV3)检测方法并应用于临床检测,根据GenBank登录的PAstV 3序列,在ORF1b保守区设计特异性引物和TaqMan探针;经过反应体系和反应条件优化,对建立的实时荧光定量RT-PCR方法进行敏感性、特异性测定,并初步应用于临床粪便样品的检测。结果显示,该方法标准曲线线性关系良好,R2值达到0.997 1;与多种常见的猪病病毒均无交叉反应,特异性良好。与常规PCR相比,该检测方法敏感性是常规PCR方法的100倍,敏感性较高,批内、批间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性良好。使用该方法对临床收集的30份疑似PAstV3粪便样本进行检测,阳性率为40%,检出率高于常规PCR方法。上述结果表明,该方法的建立为PAstV3的诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

摘要：猪流行性腹泻病毒(PEDV)是高度接触性肠道传染病猪流行性腹泻(PED)的病原,是有囊膜的单股正链RNA病毒,基因组全长约28 kb。2010年以来,PEDV G2型高致病性毒株不断发生变异,给全国乃至全球的养猪业造成巨大的经济损失。反向遗传学系统,即构建RNA病毒的全长感染性克隆。近年来,PEDV主要基于靶向RNA重组、BAC系统和体外连接3种方法来建立全长感染性cDNA克隆。文章简述了反向遗传学的原理和方法。靶向RNA重组利用冠状病毒RNA的高同源重组的特点来实现病毒的拯救;BAC系统利用pBeloBAC11载体克服PEDV基因组中含有的毒性序列所导致的cDNA在高拷贝质粒中不稳定的困难;体外连接技术主要利用PEDV基因组本身存在的限制性内切酶的酶切位点或通过改造的酶切位点在体外将病毒分片段地连接成全长的cDNA克隆。另外,文章还总结了近年来基于反向遗传学技术的PEDV相关的研究进展。PEDV反向遗传学是研究PEDV病毒基因组结构功能及设计减毒活疫苗的有效工具,利用反向遗传学技术探究S基因等毒力相关基因,探究其突变或缺失对病毒致病机制的影响,揭示PEDV毒力衰减的分子机制,有望设计出具有良好免疫原性且避免毒株返毒和重组减毒活疫苗。总之,PEDV反向遗传学是研究PEDV基因组结构及功能、病毒宿主相互作用及致病机制的一种重要方法,同时也是设计PEDV减毒活疫苗一种合理有效的途径。

摘要：以CTAB法为基础,设计了一种快速分离和纯化腰果叶片总DNA的方法。研究结果表明,该改良方法简便、快速、经济、有效。分光光度法测定与电泳检测分析表明,采用该方法提取腰果叶片总DNA的纯度和完整性良好,OD260/OD230平均值为1.91、OD260/OD280平均值为1.86,可以进行PCR扩增、Southern杂交等分子生物学研究。