摘要：为研究弓形虫环核苷酸依赖性蛋白激酶（PKAR）基N在Vero细胞内的定位情况，本研究构建弓形虫TgPKAR—RFP—C2真核表达质粒，并将其真核转染至Vero细胞内。试验中利用PKAR基N序列设计引物，以反转录获得的cDNA模板进行PCR扩增，成功获得目的片段，并构建克隆质粒pMD-PKAR。经BglⅡ和HindⅢ双酶切后构建真核表达质粒PKAR-RFP-C2，利用脂质体转染法将其导至Vero细胞内，利用Leica激光共聚焦显微镜观察PKAR基因在Vero细胞内的表达情况及其定位。结果显示，成功获得了PKAR基因，与GenBank公布的基因序列相似性为100％，并成功构建真核表达质粒及在Vero细胞内表达。Western blot试验成功检测到目的条带；激光共聚焦显微镜观察发现PKAR基因主要在Vero细胞的细胞质中呈点状表达。结果为进一步研究PKAR基因生物学功能及核酸疫苗研制奠定基础。