摘要：目的构建Sialoprotein associated with cones and rods(SPACR)原核表达载体并高效表达。方法根据基因文库中SPACR基因的cDNA序列设计引物,采用PCR方法扩增SPACR cDNA片段,并克隆进原核表达载体pGEX-6P-1中,转化于大肠杆菌BL21,测序鉴定后,用IPTG诱导表达出目的蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖柱柱层析纯化,收获表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定。结果 PCR后扩增得到的目的片段,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实重组载体pGEX-6P-1-SPACR构建正确,表达蛋白分子量约为分别为21.2、22.6、36.2及20.8kDa。结论在大肠杆菌中获得了SPACR片段的高效表达,为研究其蛋白功能奠定了基础。

摘要：目的获得鸡含缬酪肽蛋白(Valosin-containing protein,VCP)的cDNA和氨基酸序列,为进一步研究VCP和视网膜发育及病变的关系提供理论依据。方法根据已发表的鸡ATP酶p97的基因序列片段设计引物,从白来杭鸡视网膜cDNA文库中获得VCP全基因序列,并进行序列分析和比较。结果获得了VCP的全长cDNA序列,此基因cD-NA全长为有2 916 bp,并有2 421 bp的完整开放阅读框,编码806个氨基酸。鸡VCP的基因及其对应的氨基酸序列与人、小鼠VCP基因及其对应的氨基酸序列高度同源,并具有ATP酶结合位点的高度保守AAA序列。结论获得了全长cDNA序列已在Genbank中登录(AB195711),为从基因及蛋白质水平研究VCP和视网膜发育及病变的关系奠定了基础。