摘要：本文针对新课标视角下的地理教学设计进行探讨,包括地理教学设计的重要性、教学设计观、初中地理单元教学设计、以及初中地理教学中需要注意的问题。其中,重点讨论了如何科学设计教学方法与策略,突出学生主体地位与有效性,包括设计教学信息结构和建设以生为本的地理课堂等方面,旨在提高地理教学效果和促进学生的学习兴趣和探究能力。

摘要：目的·应用CRISPR/Cas9系统对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2进行靶向Piezo1基因稳定敲除,探究Piezo1对间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法·根据CRISPR/Cas9原理,设计2条靶向Piezo1基因的单链指导RNA(single guide RNA,sgRNA),利用Lenti-Cas9-GFP和Lenti-U6-sgRNA-mCherry载体分别构建表达Cas9的慢病毒和表达sgRNA的慢病毒。将2种慢病毒感染C3H10T1/2细胞,利用流式细胞分选技术对GFP和mCherry阳性的细胞进行筛选;挑取单克隆细胞,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳验证,最终得到Piezo1基因片段敲除的单克隆细胞系。序列测定、实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,qPCR)及细胞免疫荧光技术对构建的Piezo1基因敲除细胞(Piezol knockout C3H10T1/2,CPK)进行敲除效率验证。CCK-8实验检测敲除Piezo1对细胞增殖的影响;对构建成功的Piezo1基因敲除细胞进行体外成骨诱导分化,并进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及茜素红染色,利用qPCR探究敲除Piezo1对细胞的成骨相关基因mRNA水平的影响。结果·琼脂糖凝胶电泳结果显示,敲除Piezo1的单克隆细胞菌液通过PCR扩增后产物出现阳性克隆。单克隆细胞的测序结果显示,敲除Piezo1的单克隆细胞的Piezo1基因在第4外显子中提前形成终止密码子TGA,无法正确翻译蛋白;qPCR验证了CPK中Piezo1基因在mRNA水平被抑制;免疫荧光显示CPK中Piezo1基因的敲除效率较高,基本阻碍Piezo1在细胞中的表达。CCK-8实验显示敲除Piezo1后细胞增殖能力下降(P<0.05);ALP染色及茜素红染色结果显示敲除Piezo1后细胞成骨能力降低(P<0.05),且CPK中成骨相关基因如Ⅰ型胶原蛋白A1(α1 typeⅠcollagen,Col1a1)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,Osx)以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,Alp)的mRNA表达水平降低(均P<0.05)。结论·利用CRISPR/Cs9基因编辑系统成功构建靶向敲除Piezo1基因的C3H10T1/2细胞系。敲除Piezo1能抑制小鼠间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化。

摘要：本户别墅以"新东方风格"为主基调,将汉、和与南洋文化做融合性设计,用深色调材料和原木质感表现朴实沉稳的气氛,体现出耐人寻味的东方韵味,同时渗入现代的时尚元素。装饰配以几何元素的家具,在细节处做到动感,也增加了空间的视觉延伸,给观者以更多的遐想。中国书法挥洒于墙面,提升了整个空间的气质,也凸显了现代中式的神韵。

摘要：本案是幢西班牙风格的建筑。西班牙风情展现的是热情洋溢、自由奔放、色彩绚丽的独特性格．设计师在设计构思时强调立体构图．体形上讲究集合权衡．立面上注重虚实对比。在限定风格的基础上．首先考虑了区域功能的划分．以空间风格和墙体色彩统一连贯。