摘要：目的建立快速检测结核分枝杆菌环介导的恒温扩增法。方法针对结核分枝杆菌特异性保守靶序列IS6110,采用环介导的恒温扩增法(LAMP)引物设计原则设计6条引物,特异性识别靶基因序列上8个独立区域。LAMP反应过程中会产生焦磷酸镁白色沉淀,可以通过实时监测反应液浊度来判断反应结果。结果试验表明,在60～65℃恒温条件下,LAMP反应60 min内即可完成;如果在反应前添加钙黄绿素,可通过反应液颜色的变化来判断反应结果;LAMP方法的最低检出核酸浓度为101 pg/μl,其灵敏度是PCR方法最低检出浓度1.01 ng/μl的10倍,且具有良好的特异性。结论 LAMP方法检测结核分枝杆菌具有简单、快速、价廉、特异性强、灵敏度高等特点,适用于疾控工作及临床筛查或快速检测结核杆菌。

摘要：目的：构建用于筛选奇异变形菌的特异序列的基因组文库，并从中筛选变形杆菌特异的标识序列。方法：提取奇异变形菌的基因组DNA，用Sau3AI部分酶切，回收酶切产物，然后与BamHI酶切的pUC19质粒连接，转化JM109，构建奇异变形菌的基因组文库。随机挑取抗性克隆，用位于质粒上的引物进行扩增，确定插入片段的大小及分布情况。DNA测序确定部分克隆中插入的序列，根据序列设计引物，分析这些序列在奇异变形菌临床分离株中的分布，验证序列的特异性。结果：成功构建了奇异变形菌的基因组文库，库容量达到1.1×10^5CFU。阳性克隆的比例为95％，插入片段大小主要分布在200～500bp的范围。对其中14个克隆进行了序列测定，其中5个片段与已知序列有一定的同源性，另外9个与已知序列没有同源性，特异性分析发现了几个较好的标识序列。结论：成功构建了奇异变形菌的基因组文库，利用该文库发现了奇异变形菌特异的序列。

摘要：针对结核分枝杆菌保守靶基因IS6110,设计环介导等温扩增法(LAMP)特异性引物,实验结果表明,在65?C恒温条件下反应50分钟即可完成反应;在反应液中加入钙黄绿素后可通过颜色变化来判断反应结果,该LAMP方法的最低检出浓度为101pg/μl,与PCR方法的最低检出浓度1.01ng/μl相比提高了10倍,且具有良好的特异性。所以LAMP方法检测结核分枝杆菌具有简单、快速、价廉、特异性强、灵敏度高等特点,适用于疾控工作及临床筛查或快速检测结核杆菌。

摘要：研究探讨利用现代化信息技术手段,解决军队在应对突发公共卫生事件和非军事行动卫勤保障的组织协调、实时指挥、有效管控等问题。依托先进成熟的信息技术和网络通讯技术,以有线、无线、卫星等通讯手段为基础,集视频音频、网络通讯、综合显示、指挥调度和预警联动为一体,构建性能优越、功能强大的应急指挥平台,以期达到提高应对突发公共卫生事件中指挥员的整体协调能力和统揽全局的管理控制能力。

摘要：利用DNA环介导恒温核酸扩增法(LAMP)针对副溶血性弧菌特异基因tlh基因设计4条引物,通过引物特异性识别tlh基因上的6个独立区域来快速检测副溶血性弧菌.LAMP反应的过程中会产生白色沉淀焦磷酸镁,故可以通过监测浊度来判定反应结果.实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在60～65℃恒温条件下50min内完成;如果在反应前添加羟基萘酚兰(HNB),蓝色的阳性结果很明显区别于紫色阴性结果;LAMP方法的最低检出限为9.74pg/μL,PCR方法最低检出限为97.4pg/μL,LAMP方法检测灵敏度是PCR方法检测灵敏度的10倍,且具有良好的特异性.LAMP方法用于快速检测副溶血性弧菌具有检测过程简单、实验装置简便、反应结果肉眼可辨别、灵敏度高和特异性强的特点,所以LAMP方法检测副溶血性弧菌特别适合用于现场和基层检疫及医疗单位的快速诊断.

摘要：目的建立能够同时检测沙门菌、副溶血弧菌(VPH)和单核细胞增生性李斯特菌(LM)的多重环介导等温扩增(mL AMP)方法。方法分别针对沙门菌bcfD基因、VPH的tlh基因和LM的iap基因设计mL AMP引物,以LAMP进行单重LAMP检测。实时浊度监测扩增结果,优化引物浓度配比,进而建立此3种食源性致病菌的mL AMP检测体系,以PCR检测灵敏性作为比较,进行特异性和灵敏性分析。结果实时浊度监测表明,该mL AMP体系具有良好特异性,可在45 min内一次性检测以上3种致病菌,且无非特异扩增产生。这3种菌的检测最低限分别为300 fg/μl、4.2 pg/μl和4.5 pg/μl,与PCR检测灵敏度相当。结论该多重LAMP可同时检测食品中的沙门菌、VPH和LM,可作为大规模样品的初筛或传统方法的辅助方法,用于快速判定样品中是否含有这3种致病菌。

摘要：简并PCR技术是根据同源蛋白的氨基酸序列扩增到同源基因的核苷酸序列,具有独特的优点。成功进行简并PCR的关键是设计好两组引物库和对反应条件进行优化。由于简并PCR自身的特点,在新基因的克隆、基因表达检测、病毒检测和基因组研究中有其广泛而独特的应用。

摘要：目的建立一种能够对标本中的Ⅱ型单纯疱疹病毒进行准确鉴定分型的方法。方法从生殖器疱疹(GH)患者病变部位采集标本,将标本接种Vero细胞,待出现细胞病变后收获病毒感染物;提取病毒感染物的基因组。根据HSV-1和HSV-2的gD基因序列,设计合成了一对能够同时扩增两个型的病毒引物,PCR扩增感染物中病毒的序列,PCR产物克隆到pMD18-T载体,然后进行序列测定,测定序列与数据库比对,根据比对结果确定HSV的型。结果用PCR成功扩增出200bp大小的片段;测定序列与数据库的比对结果显示,该序列与HSV-2的gD基因同源性最高,表明在标本中有HSV-2病毒。测定的gD序列与国外分离株的序列存在一定的差异。结论通过PCR扩增和产物的克隆测序,能够实现对临床上难以区分的HSV-1和HSV-2的分型鉴定。

摘要：目的建立一种快速检测布鲁氏菌的多重PCR方法,为临床快速检测、准确诊断布鲁氏菌提供依据。方法针对布鲁氏菌外膜蛋白31 kD、22 kD和2a基因,各设计一对引物,扩增片断大小分别为427 bp3、17 bp和830 bp。利用纯培养物和模拟标本,分析这3对引物的特异性和敏感性。结果3对引物均能特异扩增布鲁氏菌的DNA,31 kD、22 kD和2a,扩增纯培养物的敏感性分别为2.8×103、4.6×103和2.1×104cfu,将3对引物组合在一起建立了多重PCR方法,能从模拟的细胞和血液标本中扩增出特异的产物,对模拟的细胞感染标本的敏感性为1×105cfu,对模拟的血标本的敏感性为1.2×106cfu。结论针对外膜蛋白基因,建立了能特异地检测标本中布鲁氏菌的多重PCR检测方法。

摘要：解放军疾病预防控制所,为履行职能和任务,在业务办公大楼12层建设了SPF动物实验设施,面积约240 m2。文章介绍了作者的设计思路和建设方案。同时还介绍了SPF动物房的建设经验。