摘要：目的研究短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)真核表达载体在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendo-thelial cell,HUVECs)中对人过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达的抑制作用。方法设计3条靶向PPARγ的shRNA,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中构建重组载体,经酶切鉴定和测序确认后,将3个重组表达载体转染到HUVECs,利用Western blot检测并筛选出抑制效果最好的重组表达载体。结果通过酶切鉴定和测序分析,靶向PPARγ的3个pGPU6/GFP/Neo-shR-NA重组载体构建成功,Western blot结果显示pGPU6/GFP/NeoshRNAPPARγ3可有效抑制高糖诱导HUVECs中PPARγ基因的表达,抑制率为63.2%。结论 PPARγ基因靶向shRNA真核表达载体构建成功,且能有效抑制HUVECs中PPARγ基因的表达。

摘要：目的:研究短发夹RNA(shRNA)真核表达载体在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中对IKKα基因表达的抑制作用.方法:设计3条靶向IKKα的shRNA,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中构建重组载体,经酶切鉴定和测序确认后,将3个重组表达载体转染到HUVECs,利用Western blot检测并筛选出抑制效果最好的重组表达载体.结果:通过酶切鉴定和测序分析,靶向IKKα的3个pGPU6/GFP/Neo-shRNA重组载体构建成功,Western blot结果显示pGPU6/GFP/Neo-shRNA3可有效抑制高糖诱导HUVECs中IKKα基因的表达,抑制率为70.6%.结论:靶向IKKα基因的shRNA真核表达载体构建成功,且能有效抑制HUVECs中IKKα基因的表达.