摘要：目的:探讨不同保存时间对血浆胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)及肿瘤相关蛋白PD-L1表达的影响。方法:使用离心和免疫吸附的方法,选取回顾性研究常用的-80℃存放1个月、1年、3年、5年的血浆EVs与新鲜血浆EVs进行对比;使用透射电镜对提取的EVs的形态进行观察;用NTA检测各组EVs的大小及数量;用ELISA试剂盒测定EVs上肿瘤标志性蛋白PD-L1的表达情况。结果:不同存储时间的血浆总蛋白水平及平均粒径大小无显著差异。而保存时间超过1年,EVs形态出现变形、聚集和碎裂等变化。随着保存时间的延长,EVs上的标志性蛋白CD63逐年减少。保存3年和5年的样本中肿瘤标志蛋白PD-L1水平明显降低。结论:存储时间对EVs表面蛋白及肿瘤标志蛋白影响较大。在以EVs为对象的研究中,需尽量采用随访设计,提取新鲜的血浆样本进行检测。在回溯性研究中,尽量选取样本库中保存一年以内的样本进行检测。