摘要：目的：构建一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的不同突变机制的质粒载体。方法和结果：设计并构建一种具两个ｌａｃⅠ突变靶基因的突变研究载体：ｐ Ｍ Ｃ ＬａｃⅠ／ Ｎｅｏ 质粒。在该质粒中，一个ｌａｃⅠ靶基因受 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子的驱动而使其在人和哺乳动物细胞内能表达，而另一个ｌａｃⅠ靶基因则不能表达。将所获得的ｐ Ｍ Ｃ ＬａｃⅠ／ Ｎｅｏ 质粒经酶切鉴定后，再进行如下功能鉴定：一是分析两个ｌａｃⅠ靶基因在大肠杆菌细胞内的功能状态，结果显示这两个ｌａｃⅠ基因在 Ｄ Ｈ５α宿主菌内功能正常；二是将其导入 Ｎ Ｉ Ｈ３ Ｔ３ 细胞内，分析两个靶基因是否能模拟哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态。结果表明其中一个ｌａｃⅠ靶基因在 Ｎ Ｉ Ｈ３ Ｔ３ 细胞中处于转录表达状态。结论：本研究构建了一种新型的突变研究载体，位于该载体上的两个ｌａｃⅠ靶基因能模拟人和哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态。

摘要：目的 :设计小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些 si RNAs的表达质粒 ,以便为在体外研究 Retn基因的功能打下基础。 方法 :(1 )设计并合成小鼠 Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段 ,并克隆到 p Silencer EM 1 .0 - N eo载体 ;(2 )用电穿孔转染和 G4 1 8筛选等方法建立能稳定表达相应 si RNAs的一组 3T3- L1细胞克隆 ;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞 ,并用 RT- PCR分析这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。 结果 :设计并构建了 4个小鼠Retn基因特异性的 si RNAs表达质粒 ,并证明其中的 2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的 si RNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。 结论 :本研究设计并构建出的小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs表达载体 ,所表达的 si R-NAs具有较强的 RNA干涉功能 ,为

摘要：目的 :将淀粉样蛋白 N端的抗原表位基因以 4种不同的组合与小鼠 Ig G重链区基因融合 ,构建抗阿尔茨海默病的重组质粒。方法 :通过 RT- PCR技术从小鼠脾组织中克隆 Ig G重链区 c DNA,将柔性接头与抗原表位基因序列设计在 5′端引物中 ,然后以克隆出的小鼠 Ig G重链区 c DNA为模板 ,用 PCR法克隆出由柔性接头将抗原表位和 Ig G重链区基因融合在一起的序列 ,并插入到 p VAX质粒载体中。结果 :扩增出来的 4种不同组合的抗原表位基因和 Ig G重链区基因融合序列大小分别为 999、1 0 2 0、1 0 0 5、1 0 2 6 bp,均与 Gen Bank上登录的相符 ;p VAX重组质粒酶切结果表明融合基因正确地插入到 p VAX载体中 ,全自动测序亦显示抗原表位基因和 Ig G重链区基因为所需基因 ,接头序列也完全正确。结论 :成功构建了抗阿尔茨海默病的 4种表位基因 - Ig G重链区融合表达的重组质粒 。

摘要：目的　获得表达小鼠抑制转录因子ROG(repressorofGATA -3)基因 ;构建表达ROG的重组腺相关病毒载体 ,制备腺相关病毒。方法　设计、合成引物 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)从CTLL- 2细胞总RNA中扩增ROG基因 ,测序成功后 ,最终连接于pAAV- MCS ,双酶切、PCR鉴定阳性重组质粒 ,并在Hela细胞中表达 ;制备高滴度重组腺相关病毒。结果　成功扩增了小鼠ROG基因 ,构建表达ROG基因的重组腺相关病毒表达载体 ,并成功表达于Hela细胞。结论　本实验构建的小鼠ROG重组腺相关病毒将为哮喘的基因治疗研究奠定物质基础。

摘要：目的:获得表达小鼠ROG(repressor of GATA 3)基因的重组腺相关病毒载体,制备表达ROG的重组腺相关病毒。方法:设计、合成引物,通过RT PCR法从CTLL 2细胞总RNA中扩增ROG基因,测序确认后,连接于pAAV MCS载体,双酶切、PCR鉴定重组病毒载体;制备高滴度重组腺相关病毒。结果:成功扩增了小鼠ROG基因,构建可表达ROG基因的重组腺相关病毒载体,并获得表达ROG的重组腺相关病毒。结论:本实验获得的小鼠ROG重组腺相关病毒,将为支气管哮喘的基因治疗研究奠定基础。