摘要：利用Affymetrix寡核苷酸基因表达谱芯片对 2型糖尿病肾病模型动物———db/db小鼠的肾脏基因表达谱进行了研究.在此基础上,利用末端快速扩增法和RT PCR的方法,对筛选出来的一个糖尿病肾病相关EST进行了cDNA克隆和表达分析.得到了一长为 1 7kb的cDNA片段.序列分析和网上数据库比对发现,此cDNA片段是小鼠表达序列AL0 2 30 0 1的一部分.根据AL0 2 30 0 1序列设计特异性引物,利用半定量RT PCR的方法对AL0 2 30 0 1在db/db小鼠肾脏、肝脏、脂肪、骨胳肌、脑等组织中的表达情况进行了分析,发现AL0 2 30 0 1在db/db小鼠肾脏中的表达情况与基因芯片检测结果吻合,且AL0 2 30 0 1在肝脏、脂肪、骨胳肌和脑等糖尿病肾病相关联组织中均有差异表达.这些结果提示:AL0 2 30 0 1与db/db小鼠的糖尿病肾病具有相关性.上述工作有利于揭示AL0 2 30 0 1基因的功能。

摘要：目的:克隆血管生成素样蛋白2(angiopoietin like protein2,ANGPTL2)cDNA;构建ANGPTL2纤维蛋白原样功能域原核表达载体;表达得到ANGPTL2纤维蛋白原样功能域融合蛋白;制备针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL2的功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件。方法:利用RT-PCR方法从肾脏总RNA中扩增ANGPTL2全长cDNA;以其为模板扩增编码ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的cDNA片段,并进而将其克隆至原核表达载体pET-15b上,构建成ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的原核表达载体pET-ANGPTL2;将pET-ANGPTL2导入BL21(DE3)菌内,通过IPTG诱导表达重组蛋白;利用重组蛋白5'端带有Histag的特点,采用含Ni的树脂进行亲和吸附纯化,获取高纯度的重组蛋白;将重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗ANGPTL2多克隆抗体;利用ELISA法测定和免疫组化分析对此多抗的效价和特异性进行分析。结果:取得了带有完整阅读框的ANGPTL2全长cDNA;构建成与预先设计完全一致的原核表达载体pET-ANGPTL2;成功地在大肠杆菌中进行了ANGPTL2纤维蛋白原样功能域融合蛋白的表达,纯化获取纯度很高的重组蛋白;经免疫兔获取高效价的针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体;ELISA检测和免疫组化分析表明,此抗体不仅具有很高的效价,而且具有很好的特异性。结论:我们成功地克隆了ANGPTL2cDNA,构建了其原核表达载体,进行了原核表达,成功取得高纯度的重组蛋白,并得到了高效价、高特异性针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL2功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件。

摘要：背景:新一代的强效免疫抑制剂西罗莫司具有肾毒性少、抗增殖、抗肿瘤等作用,能够减少肾移植受者的肝肾毒性和严重感染等不良反应。目的:验证以神经钙蛋白抑制剂为主要免疫抑制方案出现一种或多种危险因素时,应用西罗莫司转换治疗方案的有效性及其安全性。设计、时间和地点:回顾性病例分析,于2003-06/2006-12在解放军南京军区南京总医院解放军肾脏病研究所完成。对象:肾移植后转换以西罗莫司为主的免疫抑制剂治疗的患者93例,男59例,女34例,年龄(38±11)岁。神经钙蛋白抑制剂肾中毒者13例、神经钙蛋白抑制剂肝毒性者26例、移植后糖尿病11例、慢性移植肾肾病33例、移植后并发肿瘤10例。方法:所有患者治疗方案都采用快速转换法,即2周内撤除神经钙蛋白抑制剂,口服环孢素A或他克莫司后4h,口服西罗莫司,单次首剂负荷剂量6mg,之后维持剂量1.0～2.0mg/d。在服用第1剂西罗莫司后的5～7d检测第1次西罗莫司浓度,目标质量浓度6～10μg/L。主要观察指标:动态观察西罗莫司转换后的血肌酐水平、急性排斥反应发生率、移植肾的丢失率、肺部感染和死亡率等。结果:西罗莫司转换治疗后,神经钙蛋白抑制剂肾毒性和肝毒性患者症状明显好转,血浓度维持在(5.1±1.2)μg/L,血肌酐由(297.72±150.28)μmol/L降至(123.76±44.2)μmol/L,转换后肝功能恢复(24例,92.3%)。高糖血症患者9例恢复正常,2例改善;17例血肌酐下降大于原肌酐水平的25%,有效率为51.5%;10例肿瘤发生于肾移植后6～43个月,8例稳定无复发,2例死亡。西罗莫司转换治疗6个月内发生急性排斥反应3例。并发症主要包括高脂血症和蛋白尿。3例死亡,6例返回透析治疗,2例移植肾摘除。转换治疗3年人肾存活率分别为90.9%和75.8%。结论:使用神经钙蛋白抑制剂的肾移植受者时出现一种或多种危险因素时,切换成西罗莫司和霉酚酸酯免疫抑制方案后不良反应减少。