摘要：背景:在造血干细胞采集过程中需以复方枸橼酸钠抗凝全血,枸橼酸盐可鳌合血液中的钙离子,形成不能离子化的枸橼酸钙而引起血液中钙离子下降,引起低钙血症。目的:探寻在外周血干细胞采集期间预防及治疗低钙血症的最佳方法。设计、时间及地点:析因设计的观察对比实验,于1998-10/2007-12在华中科技大学附属协和医院血液科完成。对象:共纳入168例外周血造血干细胞采集患者,其中健康异基因外周血造血干细胞供者122例,自体外周血造血干细胞移植46例。方法:采集前皮下注射粒细胞集落刺激因子进行干细胞动员,至第5天应用Cobe Spectra血细胞分离机的自动外周血干细胞采集程序进行外周血造血干细胞采集,平均循环血量为8410mL,分离过程中平均采血速度为42mL/min。163例供者采集2次,5例采集3次,共341次。根据补钙方案分为2组,口服组102例供者(共209例次采集)口服葡萄糖酸钙;静脉组66例(共132例次采集)静脉持续滴注葡萄糖酸钙。主要观察指标:采集期间观察两组供者低钙血症相关症状的发生,采集完毕后从产品袋中留取标本计算有核细胞数和CD34+细胞计数。结果:①口服组209例次的供者采集中,43例次(20.6%)出现如口周、四肢麻木感、胃肠道反应、胸闷、头昏等的低钙血症表现,经加大口服葡萄糖酸钙剂量或静脉注射100g/L葡萄糖酸钙症状均得到控制;静脉组132例次的供者采集中,5例次(3.8%)出现低钙血症表现,经加大静脉注射100g/L葡萄糖酸钙症状亦得到控制。口服组供者低钙血症的发生率显著高于静脉组(P0.05)。结论:应用血细胞分离机采集外周血造血干细胞时,采用静脉持续滴注葡萄糖酸钙补钙的方法明显优于口服葡萄糖酸钙,且不影响造血干细胞的采集效率。

摘要：背景:血管内皮细胞是移植物抗宿主病中异基因T淋巴细胞的重要靶组织,而血管内皮细胞损伤、活化后组织因子表达显著增高。因此血管内皮细胞组织因子表达可能在移植物抗宿主病引起的组织损伤中发挥重要作用。目的:探讨异基因T淋巴细胞能否诱导血管内皮细胞组织因子表达及其分子机制。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2008-03/10在华中科技大学同济医学院免疫学实验室完成。材料:人原代脐静脉内皮细胞来源于美国Sciencecell公司。方法:密度梯度离心法分离健康志愿者外周血单个核细胞,分别用结合CD4和CD8抗体的磁珠阳性分选CD4+T细胞和CD8+T淋巴细胞。脐静脉内皮细胞经PBS充分洗涤后,异基因CD4+和CD8+T淋巴细胞以10:1的比例加入脐静脉内皮细胞,以未与T淋巴细胞混合培养组为对照。将脐静脉内皮细胞分别与细胞通路阻滞剂—特异性Jun氨基末端激酶抑制剂、特异性p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂、特异性细胞外信号调节激酶抑制剂提前温育1h,然后再与异基因CD4+和CD8+T淋巴细胞共培养,以未加入细胞通路阻滞剂为对照组。主要观察指标:实时定量PCR和流式细胞术检测异基因T淋巴细胞作用后脐静脉内皮细胞中组织因子在基因和蛋白水平的表达。Westernblot方法检测脐静脉内皮细胞中丝裂原活化蛋白激酶的表达。结果:异基因CD4+T淋巴细胞作用6,12,24h后,脐静脉内皮细胞膜表面组织因子表达率及mRNA表达水平较对照组显著增高(P<0.05)。异基因CD8+T淋巴细胞作用6,12,24h后,脐静脉内皮细胞膜表面组织因子表达率及mRNA表达水平较对照组亦显著增高(P<0.05)。异基因CD4+T淋巴细胞诱导12,24h的脐静脉内皮细胞膜表面组织因子阳性表达率显著高于异基因CD8+T淋巴细胞(P<0.05)。异基因T淋巴细胞作用后,脐静脉内皮细胞内磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和Jun氨基末端激酶表达增强,而磷酸化细胞外信号调节激酶表达无变化。特异性p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂和特异性Jun氨基末端激酶抑制剂可显著下调异基因T淋巴细胞诱导的组织因子表达,两者合用可完全阻滞组织因子的表达。结论:异基因T淋巴细胞通过Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导血管内皮细胞组织因子表达。

摘要：背景：由大剂量口服马利兰联合环磷酰胺组成的BuCy2是目前主要的移植前预处理方案之一，但存在较多口服马利兰相关副作用。目的：评价静脉马利兰预处理造血干细胞移植治疗恶性血液病的有效性及安全性。设计：病例观察。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院血液科。对象：选择2006—05／12在华中科技大学附属协和医院血液病研究所行改良静脉马利兰联用环磷酰胺为预处理方案的异基因的造血干细胞移植13例慢性粒细胞白血病患者及6例急性白血病患者，男12例，女7例，年龄14—50岁，平均33岁，其中亲缘性移植9例，非亲缘移植10例，造血干细胞来源：外周血18例，骨髓1例。所有患者及家属对治疗项目知情同意。方法：应用静脉注射马利兰组成的BuCy2预处理对患者进行异基因造血干细胞移植，即所有患者均采用目前国内外通用的改良马利兰联用环磷酰胺方案，即移植前10d口服羟基脲40mg／kg，移植前9d静脉滴注阿糖胞苷2g／m^2，移植前8，7，6d应用马利兰针剂0．8mg／kg（该剂量根据既往研究与1mg／kg口服制剂等效），通过中心静脉插管由输液泵控制滴速大于2h输注完毕，1次，6h，共12次，静脉注射马利兰输注前可应用生理盐水或5％葡萄糖稀释至约0．5g／L（约稀释10倍）。移植前5，4d静脉注射环磷酰胺1．8g／（m^2·d），移植前3d13服甲基环已亚硝脲250mg／m^2观察患者肝静脉闭塞病以及其他副作用的发生情况，术后进行中位6．5个月的随访观察，主要观察患者疾病复发及存活情况。主要观察指标：①移植后100d肝静脉闭塞病发生及副作用情况。②随访结果。结果：纳入患者19例均进入结果分析，术后13d内均获造血功能重建，经血型转变、染色体核型及DNA多态性证实为供者植入。①肝静脉闭塞病发生及副作用：患者在移植后100d内的肝静脉闭塞病发生率和100d时的肝静脉闭塞病相关死亡率均为0，未观察到与静脉马利兰相关的严重毒副反应。②随访结果：术后6．5个月随访，1例患者因移植后肝炎死亡，2例患者复发，其中1例经氟达拉滨＋阿糖胞苷＋粒细胞集落刺激因子方案化疗及供者外周血造血干细胞支持后目前已经获得完全缓解，经DNA多态性证实重新获得供者植入，另1例患者目前化疗进行中。其余患者目前均无病存活。结论：静脉马利兰的应用，可能在一定程度上减少了移植后肝静脉闭塞病的发生及其他口服马利兰相关的毒副作用，从而提高了移植疗效。

摘要：目的探讨转染组织因子胞内段小片段干扰RNA（siRNA）对血管内皮细胞凋亡的影响。方法体外设计组织因子胞内段siRNA I和siRNA II，插入质粒DNA后用脂质体将其转入人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）中。3组HUVEC分别转染siRNAI质粒（siRNA I组）、siRNA II质粒（siRNAII组）和pcDNA^TM 6．2GW／-miR质粒（对照组）。取各组HUVEC细胞，分别与CD8^＋T淋巴细胞进行混合淋巴细胞反应。用流式细胞仪检测混合淋巴细胞反应中HUVEC的凋亡率，用磁珠法检测混合淋巴细胞反应上清液中活化部分凝血活酶时间（APTT）。结果插入的siRNA经过测序，证实为正确序列。HUVEC转染siRNA后24h及48h，siRNA I组和siRNA II组HUVEC的凋亡率均低于对照组（P〈0．01）。siRNAI组HUVEC的凋亡率低于siRNA II组（P〈0．05）。3组上清液的APTT较对照（RPMI1640培养基）缩短（4±0．46）s（P〈0．05）。siRNA I组和siRNA II组与对照组相比较，APTT的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论组织因子胞内段siRNA构建成功。转染该siRNA可在不影响凝血功能的情况下对混合淋巴细胞反应中的内皮细胞起到一定保护作用，减少内皮细胞的凋亡。

摘要：背景：异基因造血干细胞移植是目前公认的惟一可以治愈慢性粒细胞白血病的方法，但存在供体来源少，移植相关并发症较多等问题。甲磺酸伊马替尼作为近年来人工合成的基因产物靶向药物的代表，被越来越多地运用于Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病患者的治疗中。目的：与亲缘异基因造血干细胞移植的历史资料对照，评价酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病的有效性及安全性。设计、时间及地点：非随机化同系对照，于2002-04／2006-10在华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所完成。对象：选择华中科技大学同济医学院附属协和医院收治的慢性期慢性粒细胞白血病患者90例，所有患者在治疗前均绎骨髓细胞学、细胞遗传学和，或分子遗传学检查确诊。方法：将90例慢性粒细胞白血病慢性期患者根据治疗方案分为两组。甲磺酸伊马替尼组67例，2002—04／2006—06陆续开始应用甲磺酸伊马替尼，观察截止时间为200610。口服甲磺酸伊马替尼400mg／d，每剧复查血常规，每3个月进行骨髓象及细胞遗传学检查，根据血象和骨髓象调整剂量。亲缘异基因造血干细胞移植组23例，于1999～03／2006—04收治，均采用经典或改良白消安联合环磷酰胺方案于奂处理，短程甲氨蝶呤联合环孢素A方案预防移植物抗宿主病。主要观察指标：细胞遗传学反应以及两组患者的2年生存情况。结果：观察截止时，甲磺酸伊马替尼组患者的细胞遗传学完全缓解率显著低于亲缘异基因造血干细胞移植组（60％，100％，P〈0．01）。亲缘异基因造血干细胞移植组和甲磺酸伊马替尼组患者的2年生存率分别为83．33％和77．03％，差异无显著性意义（JP〉0．05）。甲磺酸伊马替尼组治疗期间没有患者因药物副作用而停药、死亡，4例（5．97％）发生Ⅲ／Ⅳ级白细胞和，或血小板减少。亲缘异基因造血十细胞移植组中7例患者（30．4％）发生Ⅱ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病，4例治疗无效死亡。结论：与亲缘异基因造血干细胞移植相比，甲磺酸伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病患者2年生存率无差别，治疗相关并发症较少，但获得细胞遗传学完全缓解率较低。