摘要：目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。

摘要：目的针对当前国内外传统检测方法缺点,建立阪崎肠杆菌快速检测法。方法根据阪崎肠杆菌外膜蛋白(OmpA)基因,设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立并优化环介导等温扩增(loop-mediated isotherm alamp lification,LAMP)检测体系及反应条件,并进行LAMP反应的灵敏度、特异性实验及实际样品检测。结果 LAMP检测阪崎肠杆菌,优化后的条件选择为:Mg2+浓度6 mmol/L,dNTP浓度0.6 mmol/L,甜菜碱浓度0.8 mol/L,外引物与内引物的浓度比1∶4,扩增温度58℃60m in;细菌纯培养检测灵敏度为101cfu/mL;对11种细菌共26株菌进行LAMP扩增,仅8株阪崎肠杆菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性;对实际样品进行增菌检测,采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时26 h;并采用传统检测方法验证,正确性为100%。结论该方法检测阪岐肠杆菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低、耗时短,有望成为快速检测阪岐肠杆菌的有效方法。

摘要：登革病毒基因组研究的进展有利于相关疫苗研制及针对性药物设计。本文就登革病毒基因组特征、功能、抗原表位及登革病毒感染后宿主体内产生的化学增活素作用等方面的研究进展加以综述。

摘要：目的:建立环介导等温扩增(LAMP)检测大肠埃希菌耐药基因ampC的方法,并评价其临床应用价值。方法:设计3对特异性LAMP引物,建立25μL的LAMP检测体系并进行优化,确定最佳反应时间;与PCR进行比较检测其特异性和灵敏度;对54株临床分离的大肠埃希菌分别进行LAMP检测和药敏试验,评价检测耐药基因的临床应用价值。结果:成功建立了检测大肠埃希菌耐药基因ampC的LAMP方法,在65℃保温1h可实现对ampC基因的快速检测,其特异性与PCR一致,灵敏度高出PCR约10倍,耐药基因的检测与药敏试验有统计学差异(P=0.000)。结论:LAMP检测技术可望发展为快速、准确检测细菌耐药基因的方法,但目前尚不能替代药敏试验指导临床用药。

摘要：目的:构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)GD322株M基因膜内区(Mc区)重组表达质粒,并对目的序列进行序列分析。方法:根据GenBank中公布的SARS-CoVTor2株M基因序列,设计一对引物,采用RT-PCR法从SARS-CoVGD322株基因组中扩增Mc区,克隆至pET-32a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21后测序,利用ClustalX分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoVMc区翻译的氨基酸序列的差异。结果:测序结果表明该区与Tor2株对应核苷酸序列同源性为100%。与已收集的81株SARS-CoVMc区所译氨基酸(Mc蛋白)相比,与77株(占95.1%)Mc蛋白完全同源,与4株(占4.9%)仅有一个氨基酸改变。结论:本试验成功构建SARS-CoVMc区重组表达质粒;SARS-CoV各毒株间Mc蛋白氨基酸序列差异极小,提示利用任一毒株Mc蛋白制备单抗和疫苗具有普遍意义。

摘要：目的获取幽门螺杆菌hp0231和hp0410基因的序列,预测其编码蛋白HP0231和HP0410作为候选疫苗的可行性,在大肠杆菌表达系统中表达hp0231和hp0410。方法提取幽门螺杆菌标准株NCTC11639的基因组DNA,按照GenBank中幽门螺杆菌标准株22695的序列设计引物PCR,扩增hp0231和hp0410基因,克隆入pMD18-T载体中测序,进行生物信息学分析。将hp0231和hp0410克隆入表达载体pGEX-4T-1中,诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定。结果生物信息学分析表明HP0231和HP0410均为外膜蛋白,具良好的抗原性,并且与其他生物的同源性较低,其作为Hp疫苗不易产生交叉反应以及自身免疫性反应,构建的重组菌可高水平表达可溶性重组蛋白。结论HP0231和HP0410是有良好应用前景的Hp候选疫苗。

摘要：目的建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测痢疾志贺菌,并对其特异性、灵敏度与传统PCR进行比较。方法以痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)为靶序列,设计6条特异性引物(内引物、外引物和环引物各2条),优化LAMP反应体系及反应条件,检测LAMP反应的灵敏度、特异性及模拟样品,同步与PCR进行比较。结果 LAMP法和PCR均能特异性地扩增出志贺菌靶DNA,而其他非志贺菌均未扩增出特有条带。检测细菌纯培养物和模拟食品的灵敏度LAMP法分别为5.3×101cfu/ml、6.8×101cfu/ml,PCR法分别为5.3×102cfu/ml和6.8×102cfu/ml。结论利用LAMP技术,可快速、灵敏、简便地检测痢疾志贺菌,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望发展成为快速检测痢疾志贺菌的有效手段。

摘要：目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)GD322株M基因,并进行序列分析。方法根据GenBank中公布的SARS冠状病毒Tor2株M基因序列,设计一对引物,用RT-PCR法从SARS-CoVGD322株基因组中扩增M基因片段。克隆至pET-32(a)载体,转化大肠杆菌BL-21后测序,利用DNAstar和ClustalX分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoVM基因翻译的氨基酸序列的差异。结果该M基因与Tor2株M基因核苷酸同源性为99.86%;与已收集的81株SARS-CoVM基因所译氨基酸相比,和41株(占50.62%)M蛋白完全同源,37株(占45.68%)仅有一个氨基酸改变,同源性为99.55%,仅与3株(占3.70%)有2个氨基酸差异,同源性为99.10%。结论已获得具有代表性的SARS-CoVM基因重组质粒。