摘要：目的:探讨Cereblon(CRBN)对沙利度胺抑制人肺癌A549细胞及人肝癌HepG2细胞分泌VEGF/bFGF的影响。方法:采用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰技术建立稳定敲低CRBN的A549细胞系(A549_(CRBN))及HepG2细胞系(HepG2_(CRBN))并通过实时定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质印记(Western blot)实验验证。将A549细胞分为阴性对照组(A549_(luciferase))、CRBN低表达组(A549_(CRBN));HepG2细胞分为阴性对照组(HepG2_(luciferase))、CRBN低表达组(HepG2_(CRBN)),以上细胞按照3×10^(5)cells/well接种到6孔板中,放入37℃,5%CO_(2)的培养箱中培养24 h,分别加入1 ml含100μmol/L沙利度胺(thalidomide组)和1 ml 1‰DMSO(control组)的培养液,继续培养24 h再行后续实验,每组设计3个复孔。MTS法检测沙利度胺对细胞增殖的影响;Real-time PCR检测VEGF、bFGF、c-jun mRNA表达,ELISA法检测VEGF、bFGF蛋白表达。结果:与对照组比较,沙利度胺在浓度为1、10、50、100μmol/L时对A549及HepG2细胞的增殖能力无显著影响(P>0.05)。与A549_(CRBN)或HepG2_(CRBN)组比较,A549_(luciferase)及HepG2_(luciferase)组分泌的VEGF及bFGF均显著降低(P<0.05)。与A549_(luciferase)或HepG2_(luciferase)细胞的对照组比较,沙利度胺可抑制A549_(luciferase)和HepG2_(luciferase)细胞的VEGF和bFGF的表达(P<0.05),而对A549_(CRBN)和HepG2_(CRBN)细胞中VEGF和bFGF的表达无显著抑制作用;与HepG2_(luciferase)细胞的对照组比较,沙利度胺可抑制HepG2_(luciferase)细胞的c-Jun表达(P<0.01),而对HepG2_(CRBN)细胞的c-Jun表达无显著抑制作用。结论:沙利度胺对A549和HepG2细胞VEGF和bFGF表达的抑制作用可能是通过CRBN介导的,而c-Jun可能是抑制作用的关键转录因子之一。

摘要：根据尼卡地平结构特征，设计并合成了三个衍生物，化合物代号分别为９２０１、９２０２和９２０３。在体外血管、工作心脏和清醒大鼠多种实验模型上，研究这三个新化合物对心血管系统的作用特点。在大鼠主动脉环上，尼卡地平、９２０１、９２０２和９２０３抗氯化钾４０ｍｍｏｌ／Ｌ缩血管作用的ＥＣ５０值分别为１．１，０．４，１．２，７．２μｍｏｌ／Ｌ；抗氯化钙２５ｍｍｏｌ／Ｌ缩血管作用的ＥＣ５０值分别为４６，６，１．１，２．８μｍｏｌ／Ｌ；浓度在０．１～１００μｍｏｌ／Ｌ范围内，不对抗去甲肾上腺素５．５μｍｏｌ／Ｌ诱发血管收缩的作用；浓度增至１０ｍｍｏｌ／Ｌ也不对抗去甲肾上腺素０．６μｍｏｌ／Ｌ在无钙孵育液中的缩血管效应。在大鼠工作心脏上，９２０２作用强度与尼卡地平相当，浓度在０．１～１．０μｍｏｌ／Ｌ时可减慢心率，抑制心脏收缩和舒张功能，９２０１和９２０３的作用比尼卡地平弱９０％以上。在清醒大鼠上，灌胃给予尼卡地平及其三个衍生物３ｍｇ／ｋｇ均可使收缩压下降２．０～２．７ｋＰａ，降压至少可持续３ｈ，且对心率的影响轻。提示尼卡地平及这三个衍生物具有较强的扩血管作用，其中９２０１和９２０３对心脏的作用较轻，口服可产生确切的降压效应。