摘要：目的探讨RNA干扰技术对铜绿假单胞菌MexA—MexB-OprM外排泵mexB基因表达及有关功能的影响。方法设计并合成4条小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）（siRNAl、siRNA2、siRNA3和siRNA4）序列，构建干扰RNA（short hair pin RNA，shRNA）表达载体，将带有siRNA质粒电转入PAOI和临床耐药株PA03。应用E-test方法检测PA01和PA03抗生素MIC的变化。用半定量RT—PCR和定量PCR方法检测mexB的表达变化。结果经酶切鉴定siRNA表达载体构建成功，并明显提高PAO和临床耐药株PA03对抗生素的敏感性。RT-PCR结果显示干扰后的PA01和临床耐药株PA03mexB基因表达明显下降（P〈0．05）。结论siRNA成功干扰MexA－MexB－OprM外排泉mexB基因的表达，提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性，为临床上治疗铜绿假单胞菌感染，降低其耐药性提供了新的思路。

摘要：目的探讨RNA分子干扰铜绿假单胞菌MexAB—OprM外排泵MexB基因的体内效应。方法针对MexAB-OprM外排泵MexB基因设计siRNA小分子，构建干扰RNA（shRNA）表达载体，将带有小分子干扰RNA（siRNA）质粒电转入铜绿假单胞菌，从小鼠支气管内直接予以siRNA质粒干扰PAO琼脂菌体悬液（1×10^7CFU／ml）攻击，建立PA01野生型及siRNA2干扰型和siRNA阴性对照分子干扰型菌株的肺部感染动物模型。于感染后第1、2、3天腹腔注射美罗培南（100mg／kg，2次／d）。感染后第3、5、7天评估各组小鼠肺部细菌学、肺部病理学、细胞因子水平及肺组织中性粒细胞募集（MPO）水平变化。结果siRNA2干扰组小鼠，感染后3、5、7d的肺部细菌负荷明显下降。且与siRNAnon组和ScrambledsiRNA组比较，siRNA2干扰组小鼠感染早期（3d）病理学改变明显减轻；MPO及炎性细胞因子（IL-1β和IL-12）表达水平升高。而在感染后期（7d）siRNA2干扰组小鼠炎性细胞因子表达水平则下降。结论siRNA分子干扰明显增加小鼠对铜绿假单胞菌感染的抵抗力，降低肺部细菌的载量，增加早期中性粒细胞募集到感染部位并诱导铜绿假单胞菌的早期免疫应答。siRNA分子联合抗生素的治疗，为慢性铜绿假单胞菌肺部感染的治疗提供了有意义的资料。

摘要：目的初步研究siHybrids技术对铜绿假单胞菌野生菌PA01外排泵mexB基因体外沉默效应。方法针对铜绿假单胞菌野生株PAOI外排泵mexB基因设计并合成3条特异性silly—brids分子和l条阴性对照siHybrids分子。在分子浓度为50nmol／L下，分别以合成的siHybrids分子干扰铜绿假单胞菌野生菌PA01，并设实验组为铜绿假单胞菌野生菌PA01空白对照组，阴性对照组scamble（SC）-001，干预组siHybrids（si）-001、siHybrids（si）-002及siHybrids（si）-003，分别在干预12h及24h后采用***法检测各实验组中靶基因mexB基因mRNA的表达水平。进一步采用Mueller-Hinton倍比稀释法检测50nmol／L浓度下，siHybrids分子干预铜绿假单胞菌野生菌PA01前后氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L-OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）的最小抑菌浓度（Mm）值。结果不同siHybrids分子干预PA0112h后，mexB基因mRNA表达量无明显差异性；但干预24h后，mexB基因mRNA表达量：干预组（si-001，si-002，si-003）比空白对照组、阴性对照组（sc-001）有明显下降。对比干预12h、24h后mexB基因mRNA表达量，可以发现空白对照组、阴性对照组（sc-001）mRNA的表达量成上升趋势，而干预组（si-001，si-002，si-003）mexB基因mRNA表达量均呈下降趋势。siHybrids分子在干预铜绿假单胞菌野生菌24h前后的氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L—OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）MIC无明显差异性。结论在mRNA表达水平上，siHybrids分子能体外干预铜绿假单胞菌PA01mexB基因mRNA表达，此种沉默作用呈现时间依赖性，且在24h能有效地发挥干预作用。

摘要：目的研究拉考沙胺片仿制药与原研药在中国健康受试者中单剂量空腹和餐后条件下给药的生物等效性。方法用单中心、随机、开放、单次给药、两制剂、两周期交叉试验设计,共纳入60例(空腹试验30例,餐后试验30例)成年男性和女性受试者随机交叉给药。分别单次口服受试制剂和参比制剂100 mg,用液相色谱串联质谱法测定血浆中拉考沙胺的浓度。用Phoenix WinNonlin 8.0软件计算主要药代动力学参数。结果空腹组的拉考沙胺片受试制剂和参比制剂主要药代动力学参数:C_(max)分别为(4.69±1.20)和(4.67±1.36)ng·L^(-1),AUC_(0-t)分别为(58.90±8.08)和(58.44±8.48)ng·L^(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(60.61±8.63)和(60.11±9.06)ng·L^(-1)·h,t_(max)分别为0.50(0.16,3.00)和0.33(0.16,3.00)h,t_(1/2)分别为(13.96±1.81)和(13.77±1.79)h。餐后组的拉考沙胺片受试制剂和参比制剂主要药代动力学参数:C_(max)分别为(3.38±0.77)和(3.28±0.63)ng·L^(-1),AUC_(0-t)分别为(57.12±9.70)和(57.21±10.57)ng·L^(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(58.71±10.57)和(58.83±11.51)ng·L^(-1)·h,t_(max)分别为2.50(0.33,6.00)和2.00(0.33,6.01)h,t_(1/2)分别为(13.35±2.06)和(13.31±2.32)h。在空腹及餐后条件下,受试制剂与参比制剂主要药代动力学参数的90%置信区间均在80.00%~125.00%。结论在空腹及餐后条件下,中国健康成年受试者单次口服拉考沙胺片仿制药与原研药具有生物等效性。