摘要：目的检测载脂蛋白A-Ⅱ(apolipoprotein A-Ⅱ,APOA-Ⅱ)与阿霉素(adriamycin,ADM)耐药的相关性。方法 IC_(50)分析细胞对ADM的敏感性;激光共聚焦检测MCF7/W细胞、MCF7/ADM细胞及APOA-Ⅱ高表达的MCF7/W细胞内ADM的分布;RT-PCR和Western blot分别检测MCF7/W和MCF7/ADM细胞内APOA-Ⅱ基因及蛋白的表达;IC_(50)分析高表达APOA-Ⅱ的HEK293细胞的药敏性以及高表达APOA-Ⅱ的乳腺癌细胞T47D、MDA-MB231的药敏性。结果MCF7/ADM细胞与MCF7/W细胞相比,耐药指数达13.0(P<0.05);MCF7/W细胞中的ADM在细胞核中大量聚集,而MCF7/ADM细胞中ADM则几无细胞核分布;同时,高表达APOA-Ⅱ蛋白的MCF7/W细胞,其细胞核中ADM的分布明显少于正常表达APOA-Ⅱ的MCF7/W细胞;MCF7/ADM细胞中APOA-Ⅱ的基因及蛋白表达水平均高于亲本细胞(P<0.05);转染了APOA-Ⅱ的HEK293细胞对ADM的敏感性明显降低(P<0.05);并且转染了APOA-Ⅱ的乳腺癌细胞T47D、MDA-MB231对ADM的药敏性也降低(P<0.05)。结论APOA-Ⅱ蛋白与乳腺癌ADM耐药相关,为临床ADM的化疗提供了一定的指导意义。

摘要：目的在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达改造后的骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10)全长基因,纯化后检测其生物活性,以期获得具有生物活性的BMP10分子。方法于rh BMP10的propeptide与mature chain基因片段之间插入6×his-tag标签及DDDDK(肠激酶识别位点),构建p MH3-rh BMP10-histag-DDDDK质粒,电转入CHO细胞,用500μg/ml G418从单克隆中筛选出稳定表达目的蛋白的重组细胞,悬浮驯化表达8 d后,收集培养液上清,阴离子交换柱和镍柱纯化目的蛋白。采用q-PCR法检测纯化蛋白的体外细胞活性。结果目的蛋白纯化液经SDS-PAGE检测到的条带相对分子质量与目的蛋白理论值相符,Western blot分析可见相对分子质量约48 000、96 000和190 000的3个条带,与目的蛋白单体及多聚体相对分子质量一致。酶切后的目的蛋白可有效刺激P19细胞的标志蛋白(Smad6)表达上调。结论 BMP10 propeptide的存在对BMP10的蛋白活性具有重要作用,改造后的BMP10在CHO细胞中表达具有一定的生物活性。本研究为全长BMP10活性二聚体的制备提供了新的思路。

摘要：设计并表达可用于纯化IgG的新型高载量抗体结合蛋白CBD-SPG。利用基因重组技术将纤维素结合结构域(Cellulose Binding Domain,CBD)基因插入到表达载体pET28a-SPG中,获得重组质粒pET28a-CBD-SPG,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导CBD-SPG融合蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。重组表达质粒pET28a-CBD-SPG经双酶切及测序验证元误;表达产物经SDS-PAGE和Western Blot分析表明融合蛋白的表观分子量约为40kD;CBDSPG具有良好的结合纤维素和抗体的能力,晶体纤雏素Avicel ph101对CBD-SPG的载量可达11.6l mg/g(w/w)。成功构建并运用原核系统表达CBD-SPG;CBD-SPG在保持良好抗体结合能力的同时,更具有了结合纤维素的能力,有望成为一种新型的亲和材料。