摘要：单链阻遏蛋白ＲＲＴＲＥＳ是噬菌体４３４阻遏蛋白的衍生物，含有两个ＤＢＤ（ＤＮＡ结合结构域），一个是野生型噬菌体４３４的ＤＢＤ－Ｒ，另一个是突变型ＤＢＤ－ＲＴＲＥＳ，二者用重组接头以头接尾的方式连接起来．ＲＴＲＥＳ的ａ－３－螺旋中－１，１，２，５位ＤＮＡ结合氨基酸分别为Ｔ，Ｒ，Ｅ，Ｓ．利用核心序列是ＣＡＴＡＣＡＡＧＡＡＡＧＮＮＮＮＮＮＴＴＴＡＴＧ的随机ＤＮＡ库，体外循环筛选ＲＴＲＥＳ的ＤＮＡ结合位点，将筛选到的群体克隆、测序．单链阻遏蛋白ＲＲＴＲＥＳ的亲和力测定表明，最适操纵区序列含有ＴＴＡＣ或ＴＴＣＣ（上述画线部分）时，　Ｋｄ值在　１０－１２～－１１　ｍｏｌ／Ｌ的范围．天然噬菌体４３４阻遏蛋白与其操纵区的亲和力的　　Ｋｄ值在１０－９ｍｏｌ／Ｌ数量级，与之相比，所筛选操纵区的亲和力明显提高．同时发现，亲和力大小还受到最适结合位点两侧碱基的影响，特别是５’位碱基的影响．根据ＲＴＲＥＳ的识别特性，设计了共有序列为ＧＴＡＡＧＡＡＡＲＮＴＴＡＣＮ或ＧＧＡＡＧＡＡＡＲＮＴＴＣＣＮ（Ｒ为Ａ或Ｇ）的单链阻遏蛋白ＲＴＲＥＳＲＴＲＥ的操纵区序列．结果表明，它们之间有特异性结合，且亲和力也很高．此方法可望用于其他ＤＮＡ结合蛋白新?