摘要：背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成。材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供。方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5’末端添加一段5’-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA。纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定。结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整。②双链cDNA文库大小介于0.5～3kb之间。③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3～2kb之间,文库具有较好的多样性。结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。

摘要：运动处方教学是目前教育界讨论的热点话题,对于高校研究生应该怎样进行体育教学和采取什么样的方式教学,各院校意见不一。运用文献资料法,从运动处方概念和运动处方教学观点出发,结合研究生自身特点,提出在研究生中开展运动处方教学的理念,并设计出了相应的处方教学模式,旨在为研究生体育教学的开展提供理论参考。

摘要：为克隆猪己糖激酶2基因,分析其生物功能,采用已报道的人及小鼠HK2的cDNA序列为依据,利用电脑克隆策略获得的eSTs设计引物,扩增新的猪HK2基因cDNA序列。将PCR产物克隆测序,分析获得的核苷酸序列及其编码蛋白的特性,分离的开放阅读框全长2754bp,编码917个氨基酸,与人和小鼠的核苷酸序列同源率分别为90%和87%,与人和小鼠的氨基酸序列同源率分别为96%和94%,利用生物信息学软件分析出此蛋白的理化特性并预测了其蛋白结构,为进一步开展猪HK2基因的结构功能、表达调控的相关研究奠定了基础。

摘要：选用21日龄断奶的三元杂交仔猪60头,按完全区组设计分为3组:处理1,饲喂添加0.2%中草药复方日粮;处理2,饲喂添加0.02%硫酸粘杆菌素日粮;处理3,饲喂玉米-豆粕型基础日粮(对照)。分别于饲喂后7d、14 d和28 d考察仔猪外周血白细胞分类和抗氧化功能的变化。结果表明:中草药复方能显著提高外周血白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞计数,超氧化物歧化酶活性及中性粒细胞和单核细胞百分率(P<0.05);显著降低丙二醛和一氧化氮含量(P<0.05),提示本试验所用中草药复方可显著增强断奶仔猪的免疫功能、减轻炎性反应及断奶应激造成的损伤,其抗应激效果优于粘杆菌素。

摘要：根据南芥菜花叶病毒(Ar MV)外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条Taq MAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测Ar MV的新方法。该方法有机地结合了巢式PCR和Taq MAN探针检测技术。第二步半巢式-RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Realtime PCR等方法高。结果表明:该方法检测灵敏度可达0.06 fg/μL植物总RNA。

摘要：番茄丛矮病毒(ToBSV)是我国进境植物检疫对象,也是进境种子苗木等必检项目。该病毒能侵染番茄、曼陀罗、葡萄、豇豆等20余科120余种植物。该研究根据ToBSV全基因组中p33蛋白基因,设计引物和Taq Man探针,建立了半巢式实时PCR检测ToBSV的新方法。该研究巧妙地融合了巢式PCR和Taq Man探针技术,第二步半巢式-RT-Realtime PCR既进一步放大了第一步检测信号,也是对第一步PCR产物的确认,与单一的巢式PCR或Realtime PCR等方法相比其检测的准确性、灵敏度更高。该方法检测灵敏度可达50 fg/μL植物总RNA。

摘要：应用SolidWorks软件的Flow Simulation插件对乳化头部件进行了计算流体力学(CFD)分析,模拟了4个CFD项目:(1)流体为水、转速3 000 r/min;(2)流体为一种高黏度流体、转速3 000r/min;(3)流体为水、转速6 000 r/min;(4)流体为一种高黏度流体、转速6 000 r/min。通过流体动力学仿真分析,获得了不同黏度的流体、不同转速下的流场运动分布速度云图及带矢量云图;通过粒子轨迹示踪法,直观地观察到物料粒子在乳化头作用下的分散效果。当流体黏度低时,提高转速可明显提高分散效果,而当流体黏度高时,提高转速对分散效果的改善并不明显。因此,CFD流体分析可为乳化头结构的优化设计提供有力的参考。

摘要：为建立可同时鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)以及猪圆环病毒2型(PCV2)、3型(PCV3)的三重PCR方法,根据GenBank中登录的ASFV、PCV2、PCV3相关基因保守序列,分别设计合成特异性引物,通过对引物浓度、退火温度、循环数等反应条件进行优化,建立了针对3种病原的三重PCR检测方法,并开展了敏感性、特异性及重复性试验。结果显示:引物最佳终浓度为0.375pmol/μL,最佳退火温度为61℃,最佳循环数为35;该方法对ASFV、PCV2、PCV3的扩增目的条带分别为873、530和217bp,对猪细小病毒和伪狂犬病病毒的扩增结果均为阴性;对ASFV、PCV2、PCV3重组质粒标准品的检出下限均为1×10^(4)copies/μL;相同条件下重复性试验获得均匀一致的结果。结果表明,本研究建立的三重PCR检测方法具有特异性强,敏感性及重复性好等优点,可用于ASFV、PCV2和PCV3感染的快速鉴别诊断及流行病学调查。