摘要：目的:构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体。方法:根据人WNT5A基因mRNA序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸,将退火后形成的双链连接于pSUPER Retro RNAi质粒,构建WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体,经脂质体介导入GPG293细胞,包装成逆转录病毒。用该逆转录病毒感染人鼻咽癌细胞,Western blot法和RT-PCR检测细胞WNT5A的表达。结果:目的序列成功连接于载体并包装成逆转录病毒,免疫印迹检测和RT-PCR检测结果表明构建的WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体能显著抑制鼻咽癌细胞WNT5A的表达。结论:成功构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体。

摘要：设计和制作了红火蚁室内试探性饲养的一种新的装置和人工饲料;基于实验室饲养和其他研究,描述了一种新的红火蚁诱集器具的制作,介绍了红火蚁研究中的计数方法及应用时的注意事项,并在研究实践中反复应用。

摘要：目的构建pcDNA3.1/NTGFP小凹蛋白1及对突变体表达载体及表达蛋白生物活性进行分析。方法采用硫化修饰引物与Pfu酶结合的高度保真性聚合酶链反应体系,自行设计多对引物,分别扩增带His标签的小凹蛋白1全长目的片段、小凹蛋白1(缺失81～101位氨基酸)突变体1片段及小凹蛋白1(缺失143～156位氨基酸)突变体2片段;分别亚克隆入pcDNA3.1/NTGFPTOPO真核表达载体,转化***大肠杆菌,在含氨苄的固体LB培养基上随机挑取6个克隆,分别提取质粒后,用PCR法筛选含正确插入阅读框的阳性克隆子并测序鉴定。用脂质体介导法瞬时转染入HepG2细胞,用MTT法、Westernblot法初步鉴定GFPHis小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白的生物学活性。结果筛选得到正确pcDNA3.1/NTGFPHis小凹蛋白1及突变体表达载体,测序结果无碱基突变及阅读框移码,GFPHis小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白具有天然表达蛋白相似的生物学活性。结论成功构建具有生物学活性的pcDNA3.1/NTGFP小凹蛋白1及突变体表达载体,为小凹蛋白1的功能研究奠定基础。

摘要：目的:克隆耐辐射球菌ddrO基因,并对其进行生物信息学分析,预测其功能。方法:根据耐辐射球菌ddrO基因序列,由Primer Premier 5设计一对引物,以提取的耐辐射球菌基因组为模板,PCR扩增获得耐辐射球菌ddrO基因,序列测定并利用生物信息学软件对ddrO基因的理化性质、高级结构及生物学功能等进行分析与预测。结果:成功获得了ddrO基因。生物信息学分析发现,ddrO基因核苷酸序列长度为396bp,编码一个131aa组成的相对分子质量为14.993kD的预测的DdrO转录因子。核酸同源性搜索及比较分析仅在与耐辐射球菌同属的Deinococcus geothermalis和Deinococcus deserti中发现高度相似的序列;蛋白同源性搜索发现一些与DdrO显著同源的蛋白,如Deide_20570(95%),Dgeo_0336(90%),Deide_3p02170(82%)等;结构域分析发现DdrO含有HTH(helix-turn-helix)DNA结合结构域。结论:根据生物信息学结果预测DdrO蛋白可能具有转录调控作用,参与DNA修复和复制,在耐辐射球菌的DNA损伤修复过程中发挥一定作用。

摘要：从河南省长葛、荥阳等地采集的病鸡(临床疑似感染ILTV)喉气管组织中分离得到两株病毒,暂命名为ILTV-CG和ILTV-XY。经人工接种易感鸡,ILTV-CG组于接种后第四天I、LTV-XY组于接种后第三天部分鸡只死亡,并可致死部分鸡胚,绒毛尿囊膜增厚且有大小不等、数量不一的白色痘斑;两株病毒对乙醚、氯仿敏感;在电镜下可观察到六边形、二十面体对称、有囊膜、具空心颗粒的病毒粒子;根据GenBank中收录的ILTV TK基因核苷酸序列,设计一对特异引物,以两病毒株及参考株的DNA为模板进行PCR反应,均扩增出完全一致的特异带,扩增产物用EcoRⅠ酶切后的酶切图谱也完全一致。试验结果表明两分离株均为ILTV。