摘要：为建立一种多杀性巴氏杆菌(Pm)快速敏感的检测方法,本实验根据Pm70株kmt1基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并优化了检测反应条件。本实验建立的荧光定量PCR方法可以特异性检测Pm,而对鸭疫里默氏杆菌、支气管败血波氏杆菌等菌株检测结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法对C48-1株标准品的检测灵敏度为1.75×10~1拷贝/μL,优于常规PCR检测方法(1.75×10~3拷贝/μL) 100倍;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性。对20份疑似感染的临床病料样品(鸡肝脏、牛肺脏)进行增菌培养和分离鉴定,结果分离到8株多杀性巴氏杆菌;以建立的荧光定量PCR方法与常规PCR方法对增菌培养液进行检测,阳性率分别为40%(8/20)和25%(5/20),且荧光定量PCR方法与常规细菌分离鉴定的符合率为100%。对C48-1株感染致死的20份小鼠肝脏和脾脏组织研磨液进行检测,阳性率均为100%。本研究建立的方法能够快速、敏感的检测Pm,对于其临床和实验室的快速诊断具有重要意义。

摘要：本研究针对火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)FC-126毒株sorf1基因序列,设计特异性的扩增引物和探针,建立了检测HVT的TaqMan荧光定量PCR方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行检测。结果表明,建立的荧光定量PCR方法灵敏度高,最低可检测到1×10~2 copies/μL,比普通PCR灵敏10倍;对鸭瘟病毒、传染性喉气管炎病毒、鹅细小病毒、4型禽腺病毒和8型禽腺病毒均无特异性扩增,具有较好的特异性;组间和组内变异系数均小于1%,表明该方法重复性好。用建立的荧光定量PCR方法对82份HVT样品进行检测,结果43份为阳性,普通PCR只检测出30份阳性样品。结果表明本研究建立的HVT TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性好,灵敏度高,重要性好,为监测HVT的病毒含量提供了一种有效的手段。

摘要：利用工程渣土陶粒制备了多孔混凝土,研究了工程渣土陶粒掺量对多孔混凝土植生性能和抗压强度的影响。结果表明:随着工程渣土陶粒掺量的增加,多孔混凝土的植生性能逐渐增强,抗压强度有所降低。

摘要：深水半潜式平台经常面临复杂恶劣的海洋环境条件,破坏力巨大的波浪砰击载荷对海洋平台的结构及工作人员安全造成巨大的威胁。本文采用模型试验的方法对半潜式钻井平台受到的波浪砰击载荷进行了研究,通过设计专用的测量单元对波浪砰击载荷进行监测。根据试验结果,系统地分析了半潜式钻井平台在不同浪向下的波浪砰击载荷及其空间分布。研究表明:横浪环境中,波浪砰击最为严重,迎浪次之,而斜浪条件下的波浪砰击载荷大小和砰击频率相对缓和;砰击载荷在空间上主要分布在水线上方一定区域,具有明显的三维特征。

摘要：目的建立快速区分白纹伊蚊和埃及伊蚊的PCR结合高分辨率熔解曲线(PCR-HRM)方法。方法设计针对白纹伊蚊和埃及伊蚊线粒体ATP6和Cytb基因的2对通用引物,用PCR-HRM方法区分白纹伊蚊和埃及伊蚊。结果白纹伊蚊和埃及伊蚊ATP6和Cytb基因均扩增出不同形状的曲线,蚊种区分结果与形态学鉴定结果一致。结论采用基于ATP6和Cytb基因的PCR-HRM能准确快速区分白纹伊蚊和埃及伊蚊,可作为白纹伊蚊和埃及伊蚊不完整样本的鉴定方法。

摘要：产甲烷潜力测试广泛应用于厌氧消化(沼气发酵)过程的优化、发酵原料产甲烷潜力、污泥活性和原料毒性评价。在产甲烷潜力测试过程中,往往需要取出一定量的发酵料液用于监测其理化指标的变化,以便多角度监测厌氧消化过程性能。但是,从发酵瓶中取出发酵料液往往会使空气进入发酵瓶,影响发酵体系厌氧环境以及气体成分。既能从沼气发酵瓶中取样又不影响厌氧环境和沼气成分,是产甲烷潜力测试亟需解决的问题。针对这个问题,该研究改进了传统产甲烷潜力测试装置,设计了新的测试装置,新装置可实现发酵料液的非开口取样,使发酵过程中取样监测更加方便。对比研究了传统产甲烷潜力测试装置与新装置的测试性能,评价了装置的取样和发酵结果的可靠性。结果表明,新装置取样代表性更高,液体取样相对误差减小34.5个百分点,同时,新装置在精密性和准确度方面也表现更好,新装置测得的葡萄糖产甲烷潜力相对误差仅为1.50%,精密度略高于传统装置;新装置测试结果与理论值的相对偏差为2.19%,比传统发酵装置降低4.51个百分点,更接近葡萄糖理论产甲烷量。

摘要：为了明确传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)分离株CK/CH/HD/171018的生物学特性,本研究对所分离IBV CK/CH/HD/171018株首先进行了HA检查阴性、侏儒胚阳性检查及致病性试验;随后设计了23对引物进行全基因组内部序列扩增及使用cDNA末端快速克隆技术获得3'和5'的精准序列,并与不同基因型的参考毒株全基因组进行同源性比对、构建遗传进化树进行基因分型及重组分析。结果显示:该毒株自然状态下无血凝性,接种SPF鸡胚可导致鸡胚发育迟缓并产生典型的侏儒胚现象,对3日龄SPF雏鸡的致死率为100%;CK/CH/HD/171018基因组全长为27 688 bp,结构为5'Cap-Replicase-S-3a-3b-3c/E-M-5a-5b-N-poly(A)3',其中3'有14个A;CK/CH/HD/171018属于QX基因型,该分离株在Gene1的2个位置有QX型野毒株和CK/CH/LSC/99I型野毒株的重组痕迹,属于QX强毒型IBV。本研究丰富了IBV的生物信息数据库,为进一步从分子水平研究IBV的流行情况、变异机制及致病特征等奠定了基础。

摘要：为构建CUEDC2的突变体并在原核和昆虫表达系统中表达验证,根据人cuedc2序列设计引物,以其突变体质粒为模板PCR扩增目的片段,酶切后连接至pET28a原核表达载体以及pFastBac1-Flag-N和pFastBac-HTA昆虫表达系统的表达载体。转化至DH5α后提取质粒,经菌液PCR、测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)及DH10Bac感受态细胞中。原核表达载体在***中表达后用Ni-NTA亲和纯化,SDS-PAGE检测。昆虫表达载体提取杆粒,转染至昆虫细胞Sf9中表达。最后用western进行鉴定。结果成功构建了CUEDC2的突变体,并在原核和昆虫表达系统中表达。说明在原核和昆虫表达系统中,成功表达的CUEDC2突变体蛋白为CUEDC2的结构和功能研究奠定了基础。