摘要：为建立塞尼卡谷病毒(SVV)重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法,本研究针对SVV 3D基因设计了引物和探针,通过反应条件优化、特异性、灵敏性和重复性试验,建立了SVV RPA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,该方法与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、圆环病毒、伪狂犬病毒无交叉反应;在40℃、20 min内可检测的最低浓度为56拷贝/μL质粒标准品;通过3次重复试验检测,LFD检测线灰度值变异系数范围在4.49%~9.73%。利用该方法对120份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究首次建立了检测SVV的等温、快速RPA-LFD方法,读取结果不依赖任何仪器设备,为猪群感染SVV的现场快速诊断、流行病学研究和根除方案的制定提供帮助。

摘要：为建立一种能同时快速、灵敏、准确检测产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的多重PCR检测方法,根据genBank中ETEC K88(F4)、K99(F5)、987P(F6)、F41和etp A黏附素基因的保守序列设计并合成了5对特异性引物,通过多重PCR反应条件优化,建立了一种能快速检测5种黏附素基因的多重PCR方法。结果表明,该方法可同时特异性扩增出大肠杆菌K88、K99、987P、F41和etp A基因片段,对鼠伤寒沙门菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、猪巴氏杆菌、猪霍乱沙门菌、单增李斯特菌均无特异性扩增。敏感性试验结果显示,用该多重PCR能检测到K88、K99、etp A、F41和987P基因的最小活菌数分别为1.1×10^(6)、1.2×10^(6)、6.3×10^(5)、1.2×10^(5)和6.2×10~4CFU/m L。K88、K99、987P、etp A和F41的基因组DNA的检测下限分别为1.17×10^(-3)、0.1、1.88×10^(-3)、2.55×10^(-3)和1.0×10^(-5)ng/μL,表明其敏感性较高。人工模拟污染粪便样品试验结果表明,人工污染粪便样品中K88、K99、F41、987P和etpA的检测限分别为2.5×10^(8)、2.5×10^(8)、2.5×10^(3)、1.9×10^(7)和1.75×10^(3)CFU/g,进一步验证了非预增菌下该多重PCR方法的临床可行性。并利用所建立的多重PCR方法对80株大肠杆菌临床分离株进行检测,K88的阳性率为12.5%(10/80),K99的阳性率为1.25%(1/80)。研究表明:建立的产肠毒素大肠杆菌黏附素基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性,可用于临床上大肠杆菌分离菌株黏附素基因的快速鉴定。

摘要：目的:通过构建β-catenin siRNA慢病毒表达载体,研究Wnt信号通路与顺铂诱导非小细胞肺癌耐药的相关机制。方法:根据β-catenin基因mRNA序列,设计并合成3对shRNA序列,退火形成双链DNA,与慢病毒载体pLentiLox3.7连接、转化,挑取阳性克隆进行测序鉴定;转染293T细胞,包装产生慢病毒,检测滴度;感染A549细胞,筛选出有效抑制靶点;将慢病毒感染A549/DDP耐药细胞株24 h后,用不同浓度的顺铂干预48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;根据细胞预先有无慢病毒感染,分为A549组、A549/DDP组、A549/DDP+siRNA组、A549/DDP+siNC组,用8μg/m L顺铂处理各组细胞,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法测定各组细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Wnt信号通路关键因子β-catenin表达水平。结果:经DNA测序鉴定,成功构建β-catenin siRNA慢病毒载体,并筛选出有效抑制靶点;相同浓度下顺铂对A549细胞抑制作用明显大于A549/DDP细胞(P<0.05),对A549/DDP+siRNA组细胞的抑制作用也强于A549/DDP细胞;8μg/m L顺铂干预后,A549/DDP组β-catenin及LC3Ⅱ的表达明显高于A549组(P<0.05),而A549/DDP+siRNA组β-catenin和LC3Ⅱ表达较A549/DDP组减少。结论:Wnt信号通路参与非小细胞肺癌对顺铂产生的耐药,该过程与细胞产生自噬有关。

摘要：介绍了20t/a规模的双戊烯连续气相催化脱氢反应中试装置的研制,涉及工艺流程、设备流程、关键设备等研究,重点探讨了预热器、气化器和反应器等关键设备的设计,细化研究了气化器中普通喷头和超声波喷头的结构与性能,并开展了中试装置实际运行试验,对伞花烃的收率为92.65%～97.09%(普通喷头/260～280℃)和97.04%～98.16%(超声波喷头/260～280℃)。

摘要：目的:验证在HeLa细胞系中是否存在Zwint-1 v7选择性剪切亚型的mRNA和蛋白产物。方法:在缺失片段两侧设计引物,利用PCR和克隆测序验证HeLa细胞中是否存在缺失片段的mRNA;构建Zwint-1 v7 3′端特异区段(Z7)的GST融合表达载体pgeXKG-GST-Z7,转化入BL21菌种诱导表达,菌体经超声破碎和2 mol/L尿素洗涤纯化,融合蛋白经SDS-PAge电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫C57BL/6小鼠,收获多克隆抗血清Anti-Z7,采用Dot b lot检测多克隆抗体的效价,Western blot检测HeLa细胞全蛋白中的Z7蛋白产物。结果:PCR和测序结果表明存在缺失37 bp的核酸片段;SDS-PAge电泳显示在30.7 kDa处出现明显的蛋白条带;Dot blot结果表明1∶5 000稀释的多克隆抗体能检出12 ng GST-Z7;Western blot结果表明,1∶200稀释的多克隆抗体可识别HeLa细胞中Zwint-1 v7蛋白。结论:本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了HeLa细胞中存在Zwint-1 v7。

摘要：临床循证决策过程中需要基于最佳证据,综合考虑干预措施利弊大小、证据确信度、成本与可行性等因素。通过制定患者健康结局指标效应量决策阈值(decision threshold of effect size,DTES),能够帮助利益相关者理解干预措施利弊大小、评估证据确信度和解读研究结果。MERge工作组充分借鉴国际经验,通过小组讨论、半结构化访谈、专家共识和试点应用,开发了一套包括8个步骤的健康结局指标DTES制定方法指南,包括:必要性评估、组建工作组、遴选患者重要结局、基于最佳证据制作情景示例、设计专家函询问卷、分析专家涵询结果、面对面专家共识以及推广应用与后效评价。DTES指南的开发,以期为利益相关者制定不同领域健康结局指标的DTES提供方法指导。

摘要：介绍了三维数字测力铅球研制的设计思想、主要结构、功能及技术参数,并结合录像对实际测量结果进行分析与评价。采用的仪器是目前使用较为广泛的单片机微电脑处理系统和成熟的压力传感技术,通过和专项器械铅球相结合,实现了对实际运动中肢体游离端动态力的测量,能够快速、便捷、准确地反馈运动员在整个投掷过程中的用力特点,可以协助教练员对运动员进行技术诊断,制定科学的训练计划。

摘要：为了有效调节天然气能源结构,我国大力发展西气东输工程,先后建成一线、二线工程。天然气管道压缩机主要为天然气运输提供动力,一旦出现停机故障,就会对管输量造成很大影响。为此,对压缩机停机故障原因进行分析,希望对提高压缩机运行水平起到有利作用。

摘要：背景青少年恶性实体肿瘤的临床特征及预后与儿童和成人不同。目的总结北京地区多中心诊治的青少年恶性实体肿瘤的临床特征及预后。设计横断面调查。方法回顾性分析2010年1月1日至2019年12月31日北京地区7家医院确诊的且当时年龄≥10岁的恶性实体肿瘤初发患儿的临床特征和预后。主要结局指标3年无事件生存率(EFS)和总生存率(OS)。结果共411例恶性实体肿瘤患儿纳入分析,中位年龄150(120~216)月,男239例(58.2%),女172例。中枢神经系统肿瘤183例(44.5%),尤文肉瘤82例(20.0%),横纹肌肉瘤47例(11.4%),神经母细胞瘤33例(8.0%),非横纹肌肉瘤类软组织肉瘤29例(7.1%),颅外生殖细胞肿瘤18例(4.4%),其他肿瘤19例(4.6%)。411例恶性实体肿瘤患儿中,前3位户籍来自华北地区160例(38.9%),华东地区97例(23.6%),中南地区70例(17.0%)。治疗涉及1家、2家和≥3家医院患儿分别有129例(31.4%)、180例(43.8%)和102例(24.8%)。截至末次随访时间2020年6月30日,411例恶性实体肿瘤患儿中位随访时间26(1~120)个月,生存333例(81.0%),死亡78例,发生肿瘤复发/进展145例(35.3%)。3年总体EFS为60.3%,以中枢神经系统肿瘤最高(73.7%),横纹肌肉瘤最低(37.4%);3年总体OS为79.5%,以中枢神经系统肿瘤最高(87.9%)。78例死亡病例中位生存时间13(1~65)个月,其中中枢神经系统肿瘤22例(28.2%),横纹肌肉瘤18例(23.1%),尤文肉瘤16例(20.5%),神经母细胞瘤8例(10.3%),颅外恶性生殖细胞瘤3例(3.8%),非横纹肌肉瘤类软组织肉瘤5例(6.4%),其他肿瘤6例(7.7%)。结论青少年恶性实体肿瘤以中枢神经系统肿瘤最多见,神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤和颅外恶性生殖细胞瘤预后不佳。

摘要：目的探讨天鹅形状记忆加压接骨器(SMC)治疗肱骨干骨不连的临床疗效。方法30例肱骨骨不连患者全部采用SMC进行治疗。术后根据正侧位X线片复查骨不连愈合情况,应用Neer-Morrey评分分别对患者肩、肘关节功能进行评价。结果30例均获随访,时间2～6年,29例术后平均(3.8±1.1)个月骨不连处为类骨板样骨替代,1例因跌伤再次骨折后拒绝治疗。21例6个月～2年去除SMC,未发生再骨折、感染等并发症。余者因年龄>65岁未取出。除4例在接受SMC治疗前已存在桡神经损伤症状外,余均未引起桡神经损伤。肩关节功能:优28例,良1例,差1例。肘关节功能:优29例,差1例。结论SMC由于其独特的设计及材料优势,中远期随访证实其应用于治疗肱骨干骨不连时具有良好的临床疗效。