T=题名(书名、题名),A=作者(责任者),K=主题词,P=出版物名称,PU=出版社名称,O=机构(作者单位、学位授予单位、专利申请人),L=中图分类号,C=学科分类号,U=全部字段,Y=年(出版发行年、学位年度、标准发布年)
AND代表“并且”;OR代表“或者”;NOT代表“不包含”;(注意必须大写,运算符两边需空一格)
范例一:(K=图书馆学 OR K=情报学) AND A=范并思 AND Y=1982-2016
范例二:P=计算机应用与软件 AND (U=C++ OR U=Basic) NOT K=Visual AND Y=2011-2016
摘要:目的:为建立恒河猴 p53基因沉默模型,首先在细胞水平筛选和测定恒河猴 p53基因有效沉默靶点。方法测定非洲绿猴肾来源成纤维细胞 COS-7中 p53基因的表达水平;对恒河猴 p53基因做生物信息学分析,优选靶序列设计 shRNA,克隆入慢病毒载体 FUGW-TDT,转染 COS-7细胞,以 real-time PCR 检测 p53 mRNA 抑制水平,以 Western blot 检测 p53蛋白水平表达变化。结果在 COS-7细胞检测到 p53基因的表达;生物信息学筛选到3个靶片段,分别位于 p53 mRNA 的238~258 bp,681~701 bp,169~189bp,均在开放阅读框内; p53三个靶位点的沉默效率在 mRNA 水平分别为(87.17±4.03)%,(72.62±14.11)%,(76.22±0.98)%;在蛋白水平的沉默效率分别为(84.44±2.18)%,(71.0±1.18)%,(74.17±0.95)%。结论在细胞水平筛选得到3个有效的 p53基因沉默靶点,可用于后续的恒河猴基因沉默研究。
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