摘要：数字聚合酶链式反应(digital polymerase chain reaction,dPCR)技术可以针对低浓度的目标核酸分子实现精确的绝对定量检测,在各类疾病的检测与治疗方面有着极大应用价值.针对目前商业数字PCR仪造价昂贵、体积庞大等缺点,基于智能手机与微流控芯片,设计开发了一种低成本、高集成的智能数字PCR设备.介绍了硬件系统的制作以及整机的整合搭建过程.采用PID算法,结合温控电路与半导体制冷片等硬件,进行了PCR温度循环的精准控制.最后,采用自适应阈值分割法对采集到的荧光图像进行了处理,并依据泊松分布的规律对统计结果进行了校正,完成了对PCR反应后采集到荧光图像的结果分析与检测.

摘要：通过建立了三里坪水电工程整体水工物理模型,对泄洪洞出口挑流鼻坎的型式进行了多方案对比优化试验,试验结果表明,优化后的挑流出口型式可使得出流充分消能,且无论在高水头或低水头时均无溅击建筑物所在岸边的现象发生,可保证泄水建筑物的安全,并作为工程设计的科学依据。

摘要：目的建立Banna病毒核酸特异的快速、敏感的TaqMan探针RT-PCR检测方法。方法首先对从GenBank中检索到的所有Banna病毒的序列进行同源性分析及引物、探针的设计。病毒在BHK21细胞或C6/36细胞上繁殖扩增后提取病毒RNA和逆转录。以cDNA为模板分别进行TaqMan探针法RT-PCR和传统的PCR检测,并对方法的种内广谱性和特异性、检测灵敏性以及用于蚊虫和临床标本的适用性等进行评价。结果Banna病毒核酸特异的TaqMan探针RT-PCR检测方法具有较好的种内广谱性和特异性,可以检出所有12株Banna病毒,而其他虫媒病毒如辛德毕斯病毒、乙型脑炎病毒、batai病毒和环状病毒检测结果均为阴性。与传统PCR相比,敏感性高100倍以上,可以检出每50μl标本中含有0·5CCID50的Banna病毒。单链RNA变性条件(65℃)进行逆转录使检测结果的敏感性比99℃变性法最少低10倍。病毒在室温保存1天和4℃保存1周后,检出敏感性会比原来低10倍左右。该方法在检测模拟感染Banna病毒的人血清标本以及蚊虫标本时,均显示出较好的特异性。112份蚊标本中检出6份标本阳性,4份可疑阳性,病毒分离结果3份阳性。结论本实验成功建立了Banna病毒特异性核酸的TaqMan探针RT-PCR检测方法,并初步证实可用于血清标本和媒介蚊虫标本的检测,为开展Banna病毒的流行监测及临床早期诊断提供了新的技术手段。

摘要：为建立一种快速检测新孢子虫的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据GenBank中登录的新孢子虫Nc-5基因序列(X84238.1)设计2对特异性引物,通过PCR扩增将新孢子虫Nc-5基因片段并克隆至pMD18-T载体中,构建重组质粒pMD18-T-Nc-5,并经PCR和测序鉴定正确后作为质粒标准品。通过优化该方法的引物浓度、反应温度,并利用LAMP浊度仪测定扩增目的基因时出现白色焦磷酸镁的浊度值实时监控反应进程,初步建立了检测新孢子虫的LAMP方法,反应结束后通过加入SYBR Green I观察荧光对结果可视化判定。反应条件优化结果显示,引物F3/B3和FIP/BIP的终浓度分别为10 pmol/μL、20 pmol/μL,63℃扩增40 min效率最佳。利用该方法检测新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫、环形泰勒虫、双芽巴贝斯虫、伊氏锥虫核酸,并在反应结束后加入SYBR Green I观察荧光以评估该方法的特异性。结果显示仅新孢子虫核酸扩增为阳性,其余病原核酸均为阴性结果。荧光观察结果显示,新孢子虫反应管呈翠绿色荧光(阳性),其他反应管呈橙黄色荧光(阴性);对重组质粒标准品10倍倍比稀释后作为模板(即4.0×10^(7)拷贝/μL~4.0×100拷贝/μL)进行LAMP的敏感性试验,结果显示该方法对质粒标准品的检测限为4.0×10^(1)拷贝/μL,且在反应结束后加入SYBR Green I,4.0×10^(7)拷贝/μL~4.0×10^(1)拷贝/μL质粒标准品的反应管均呈翠绿色荧光(阳性),4.0×100拷贝/μL反应管呈橙黄色荧光(阴性),敏感性与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499)中荧光定量PCR方法的敏感性一致;分别以同一时间和不同时间提取的3个不同稀释度的质粒标准品进行批内和批间重复性试验,结果显示批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%。综上表明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。对895份临床疑似感染新孢子虫的动物肝脏、脑组织样品同时采用建立的LAMP方法及《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499)中的荧光定量PCR方法检测,结果显示LAMP的阳性检测率为41.45%(371/895),阴性率为58.55%(524/895),与SN/T 3499中的荧光定量PCR检测结果一致。本研究建立的新孢子虫LAMP方法快速、敏感、特异性强,且能够实时监测反应过程并能可视化判定结果,为新孢子虫现场快速检测提供了新的技术手段。

摘要：耐药结核病的流行是当前结核病控制工作面临的主要挑战之一,严重威胁人们在结核病控制领域所取得的成就.抗结核药物是控制结核病的最有效武器,但面对耐多药结核病尤其是广泛耐药结核病明显力不从心,结核病有可能因此而再度成为“不治之症”.研制更有效的抗结核药物,设计具有抗耐药结核病的化学治疗方案,化解耐药结核病的治疗困境,迫在眉睫.作者通过回顾历史,着眼现在,展望未来,阐述耐药结核病化学治疗的若干问题,期待有助于读者对耐药结核病化学治疗研究有一个较为全面的认识,共同探索化学治疗控制耐药结核病流行的可行性.

摘要：从分析我国城市影像地图集的内容和表现形式入手,基于对城市要素地理和空间认知效果探讨影响城市影像地图集内容表达的各种因素,并在分析比较几本具有代表性的图集表达方式基础上,提出能够满足城市地理和空间认知的城市影像地图集的内容表达形式。

摘要：为探索综合性医院开展戒烟干预的方法并评价其效果,采用戒烟门诊专科干预、简单干预、义诊干预和集体干预等模式对不同吸烟人群进行包括健康咨询、心理干预和药物治疗等不同形式及内容的戒烟干预,以统一规范的指标和方法评价干预效果.在项目实施的20个月中,共对690名吸烟者进行干预,对其中402名完成6个月随访的干预对象进行的初步统计分析发现：目前已完成的戒烟门诊专科干预、集体干预和戒烟义诊时的简单干预3种模式均有一定干预效果,吸娴者的吸烟量有不同程度下降,吸烟者戒烟的动机、医生采用的干预模式及强度是影响干预效果的主要影响因素;戒烟门诊专科干预和集体干预的效果优于戒烟义诊的简单干预,其6个月随访时的时点戒烟率分别为31.6%、30.9%和15.1%.戒烟者的戒烟动机和医生的态度、戒烟方法的选择及干预技能水平对戒烟成功率影响较大,因此探索适合国情的戒烟服务模式及个体化干预方法十分必要.

摘要：为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了EST序列分析。从消减文库中随机挑取16个阳性克隆,进行PCR鉴定,显示克隆的重组率大于93%,插入片段大小大部分集中在200bp～1000bp之间。随机挑取100个克隆进行测序及同源性分析,初步获得27条差异表达基因片段,其中24个为已知基因,3个为新ESTs序列;随机选择非重复的6个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消减效率。结果显示,均从构建的消减文库中扩增到目的片段,其中5个为诱导性差异表达分子,1个为诱导特异性表达分子,说明该文库有较高的质量。本研究应用抑制消减杂交技术构建了牦牛PBMC的差异表达cDNA文库,并高通量克隆鉴定了相关功能基因片段,表明该技术手段有助于快速发现牦牛新功能基因。

摘要：目的:观察多表位BCRABL融合抗原在体外激发的免疫反应对同源白血病融合细胞的杀伤效应,探索慢性髓性白血病chronicmyeloidleukemiaCML免疫治疗的新途径。方法:用人工合成含有不同HLAhumanleukcyteantigen限制性的BCRABL多个表位的融合蛋白免疫C57BL/6小鼠,取小鼠脾细胞进行体外培养,以四唑盐MTT比色法测定鼠CTLscytotoxiclymphocytes介导的特异性杀伤效应。结果:融合抗原激发产生的鼠CTL能特异性杀伤靶细胞(P0.05。结论:设计的多表位BCRABL融合抗原能激发特异性免疫反应,并对同源白血病细胞产生特异性杀伤,为进一步实验奠定了关键基础。

摘要：针对定扭矩电动扳手输出扭矩值与设定扭矩值不一致产生的非线性误差问题,提出使用BP神经网络建立扭矩参数校准模型。实验结果表明,与分段线性插值法和最小二乘法相比,BP神经网络对非线性曲线拟合程度更好。同时设计在线校准程序,将扭矩校准模型应用在扳手实际工作过程中,经试验测量,该校准模型使得扳手扭矩输出精度控制在±3%以内,具有一定的适应性和实用性。