摘要：【目的】克隆、表达克雷伯氏菌***-1菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,并研究重组酶的酶学性质。【方法】比对分析GenBank数据库中克雷伯氏菌同属的α-L-鼠李糖苷酶基因序列,设计简并引物PCR扩增基因的保守区。扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒pSE-rha1,并在大肠杆菌*** XL-blue进行诱导表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究目的蛋白RHA1的酶学性质。【结果】以pNPR为底物,进行重组酶酶学性质的研究。重组酶RHA1的最适pH值和最适温度分别为5.0和45℃,Km值为(0.223±0.030)mmol/L,V_(max)值为(1.272±0.121)μmol/(min·mg)。在pH值为6~10的缓冲液内酶活力仍保持在80%以上;在温度为40℃以下时,酶活较为稳定,但在温度高于40℃时酶活力迅速下降。RHA1能水解pNPR、橙皮苷和芦丁。【结论】RHA1具有良好的pH稳定性,不仅能够水解人工底物pNPR,还能够水解α-1,6键的天然底物橙皮苷和芦丁,具有一定的医疗应用价值。

摘要：利用计算机软件对取自ＧｅｎＢａｎｋ的嗜热栖热菌ＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＨＢ－８的ＤＮＡ聚合酶基因（Ｔｔｈ）进行分析，并设计了两组引物进行ＰＣＲ，分段克隆该基因。将两个ＰＣＲ产物同时连接到另一个克隆载体上，使之成为完整基因，最后将完整基因克隆到表达载体上，构建了Ｔｔｈ基因的表达质粒，使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。

摘要：目的探讨显微削薄的分叶股前外侧穿支皮瓣的手术设计、切取方法和其在复杂的四肢软组织缺损创面修复中的临床应用经验.方法2017年6月至2018年9月,针对复杂的四肢软组织缺损创面,选择显微削薄处理的分叶股前外侧穿支皮瓣修复不同类型的四肢软组织缺损共计12例,皮瓣均在阔筋膜浅层切取,不携带阔筋膜.供区均直接缝合关闭.采用门诊、电话及微信视频随访,观察记录皮瓣外观、感觉恢复、供区瘢痕及评定受区肢体功能恢复情况.结果本组11例显微削薄分叶股前外侧穿支皮瓣全部成活,1例皮瓣的一个分叶坏死,行局部皮瓣转位修复.术后供区仅留线形瘢痕.本组皮瓣削薄后平均厚度为(4.5±0.5)mm.术后随访5~15个月,皮瓣两点辨别觉0.5~2.0cm,评定级别S3~S3+;上肢腕关节屈伸范围65°~90°,下肢踝关节屈伸范围40°~60°.结论采用显微削薄的分叶股前外侧穿支皮瓣能一次性修复四肢复杂的不规则创面和邻近多部位软组织缺损,具有供区损伤小、皮瓣经济性能高的特点,是修复四肢复杂创面软组织缺损的一种比较理想的方法.