摘要：【目的】构建针对E2F3基因的shRNA表达载体,通过脂质体进行膀胱癌细胞内转染,监测转染效率。【方法】通过软件设计针对E2F3基因的寡核苷酸链,化学合成一对编码短发夹RNA序列,长度为64个碱基。核苷酸链经退火,克隆到经BamHI、HindⅢ双酶切的pRNAT-U6.1/Neo载体上,构建针对E2F3基因的RNA干扰质粒。通过双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建效果。通过不同浓度的Lipofectamin 2000及干扰质粒混合物进行膀胱癌细胞系5637细胞转染,通过绿色荧光的表达程度摸索出细胞最佳转染浓度及转染时间。【结果】重组构建的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo载体经PCR分析及插入基因片段序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。Lipofectamin 2000能够有效的进行pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo质粒的转染。【结论】载体的成功构建及膀胱癌细胞系的高效转染,为进一步研究E2F3基因在膀胱肿瘤中的功能奠定基础。

摘要：目的建立诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏的检测方法,为疾病预防控制提供可靠的依据。方法根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅰ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立一步法实时荧光RT-PCR快速检测反应体系,优化反应条件,评价反应体系的灵敏度、特异性、重复性,并与常规RT-PCR比较。结果诺如病毒遗传组Ⅰ型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR检测时限短,仅1h就出结果,与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒、诺如病毒遗传组Ⅱ型无交叉反应,最低检出下限为100拷贝/反应,比常规RT-PCR灵敏100倍,5份浓度不同的诺如病毒遗传组Ⅰ型标本重复检测5次,平均Ct值变异系数范围为0.39%～1.02%。结论诺如病毒遗传组Ⅰ型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏、重复性好,可应用于突发公共卫生应急检测和诺如病毒遗传组Ⅰ型监测,提高快速检测能力。

摘要：根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%～100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。

摘要：该试验旨在研究复合添加剂对甜玉米秸秆青贮品质的影响,采用随机分组设计,共分4个处理组,分别为对照组(空白)、复合菌酶组、2%糖蜜和复合菌酶组、4%糖蜜和复合菌酶组,每组3个重复,在青贮第90天时测定甜玉米秸秆青贮微生物数量、营养成分、发酵品质。结果显示,复合添加剂(糖蜜和复合菌酶组合)均不同程度地改善鲜食玉米秸秆青贮的发酵品质和营养成分,有效提高粗蛋白、粗脂肪含量(P<0.05),降低中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量(P<0.05),pH值显著降低(P<0.05),乳酸菌数量显著增加(P<0.05),乳酸、乙酸含量显著升高(P<0.05)。

摘要：目的:建立一种用近红外光谱法快速测定气滞胃痛颗粒水提过程指标成分含量的新方法。方法:运用偏最小二乘法建立近红外光谱与芍药苷HPLC测定值之间校正模型,并对未知样本进行含量预测。结果:校正模型相关系数达到0.985 9,预测相关系数达到0.981 8,其RMSEC和RMSEP分别为0.203、0.257,RSEP为7.69%。结论:该方法操作简便、快速无损、准确可靠,可用于气滞胃痛颗粒提取过程指标成分含量的快速监测。

摘要：目的:探讨胃肠手术应用快速康复外科(FTS)优化设计方案治疗的安全及可行性。方法:选取施行胃肠道手术患者194例,随机分组:快速康复外科组(治疗A组)60例;微波照射治疗结合快速康复外科组(治疗B组)73例;传统手术组(对照C组)61例,比较3组病例的各项临床指标和实验室指标。结果:3组患者的手术时间、术中出血量、出现急性胃扩张而需要重置胃肠减压管并禁食和吻合口漏方面无明显差异(P>0.05);A组与C组在切口感染和肺部感染方面无明显差异(P>0.05),在术后肛门恢复排气时间、体重减轻、术后停输液时间、切口愈合时间、术后住院时间、治疗费用、恶心呕吐、咽喉疼痛和尿路感染等方面明显减少(P0.05),B组较A组在术后肛门恢复排气时间、切口愈合时间、术后住院时间、恶心呕吐、咽喉疼痛、肺部感染和治疗费用方面明显减少(P<0.01),切口感染也减少(P<0.05)。结论:胃肠手术患者的快速康复外科治疗是一种全新外科理念,较传统手术治疗有明显优势。采用微波照射治疗结合快速康复外科治疗的优化方案更有利于患者的术后康复,是安全、可行的治疗方法之一。

摘要：为了探讨CD40抗体与CD40结合对B细胞应答小分子半抗原的增强作用,利用TRIzol法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,并反转录成cDNA;根据CD40的胞外段CDS设计引物,通过PCR扩增目的基因,构建pGEX4T-1-CD40表达载体,进行原核表达及多克隆抗体制备。结果表明,成功扩增了522 bp的目的基因,表达并纯化获得了45 ku的CD40重组蛋白,多克隆抗体抗体不但可与重组蛋白结合,与小鼠脾脏天然CD40蛋白也可以特异性结合。说明CD40重组蛋白表达成功,且制备的抗体有望模拟CD40L为B细胞活化提供第二信号。

摘要：目的比较生活方式强化干预和传统的健康教育方法对查体发现糖调节受损人群出院后近期与远期的效果。方法将147名在特需病房体检并诊断出为糖调节受损者随机分为试验组和对照组，试验组接受本研究设计的生活方式强化干预，对照组接受传统的健康教育方法，观察出院后半年、1年、1年半及2年两组人员的体重指数、空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白，以及生活方式强化干预依从性评分，并依据每次检查结果统计转归为正常的人数和进展为糖尿病的例数，并进行相关比较。结果出院半年，试验组仅生活方式强化干预依从性评分显著高于对照组（P〈0．05）。出院1年时，试验组依从性评分及指标转归为正常的例数显著高于对照组，体重指数、空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白和进展为糖尿病的例数均显著低于对照组fP〈O．05）。出院1年半时，试验组干预依从性评分显著高于对照组，空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白及进展为糖尿病的例数显著低于对照组（P〈0．05），但体重指数和各项指标转归为正常的例数，两组差异无统计学意义（P〉0．05）。出院2年时，试验组仅空腹血糖、餐后2h血糖及进展为糖尿病的例数显著低于对照组（P〈0．05），其余指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论试验组接受的生活方式强化干预与对照组接受的传统健康教育方法比较，具有更好的近期与远期效果，这种效果在出院1年时达到最高峰，之后逐渐减弱。

摘要：目的：采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）法检测急性髓系白血病（AML）中黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因转录本,初步评价其在AML中的临床意义。方法：设计PRAME基因引物,建立扩增PRAME基因转录本的EvaGreen染料法RQ-PCR法,对PRAME转录本克隆质粒进行扩增,评价其特异性、重复性和灵敏性。并对10例AML患者的骨髓单个核细胞标本进行初步检测。结果：所建立的EvaGreen RQ-PCR法具有良好的特异性,最低可检测到10个拷贝/μl的阳性模板,但其重复性差,而10^8～10^2拷贝/μl阳模的重复性良好。10例初诊AML患者PRAME转录本绝对含量为4.91×10^2～8.07×10^5拷贝/50ng（中位7.26×10^3拷贝/50ng）,ABL标化后的相对含量为4.42%～13 170.01%（中位67.98%）。而对照组8例缺铁性贫血患者中PRAME转录本相对含量为0.00%～0.01%（中位0）。1例AML患者诱导缓解后PRAME转录本下降,复发时又明显升高。结论：EvaGreen染料法RQ-PCR检测PRAME转录本方法敏感可靠,可用于AML患者临床监测。

摘要：目的:探索并构建肾肿瘤行肾部分切除术的CT三维可视化术前评估系统及其应用价值。方法:回顾性收集北京大学第一医院泌尿外科因肾肿瘤行肾部分切除术患者的临床资料做初步探究,同时收集我国16家临床中心因肾肿瘤行肾部分切除术患者的同质化标准数据,应用CT三维可视化系统(IPS系统,Yorktal)评估肿瘤解剖结构、血供等信息,通过归纳和总结构建评估系统,完成虚拟手术设计及术中辅助导航,指导临床手术。结果:基于泌尿系增强CT建立三维可视化图像,评分系统纳入肿瘤最长径和体积、肿瘤侵入实质内体积占比、肿瘤侵入实质最大深度、肿瘤与肾实质接触面积、肿瘤肾实质接触面平整度、肿瘤所在肾脏分段位置、肾血管变异情况及肾周脂肪。肿瘤平均二维直径为(2.78±1.43)cm,平均三维最大径为(3.09±1.35)cm,术后病理平均大小(3.01±1.38)cm。三维重建肿瘤最大径与术中肾动脉阻断时间延长、术中出血量显著相关(r=0.502,P=0.020;r=0.403,P=0.046)。三维重建及病理肿瘤体积分别为(25.7±48.4)cm3、(33.0±36.4)cm3(P=0.229),三维重建肿瘤体积与术中出血量显著相关(r=0.660,P<0.001),肿瘤侵入肾实质内体积占比与术中肾动脉阻断时间延长、术后并发症的发生显著相关(r=0.410,P=0.041;r=0.587,P=0.005)。肿瘤与肾实质接触面积及是否存在血管变异与围手术期指标及术后并发症未见相关性。完成术前评估的同时,重建后的三维影像可在Touch Viewer系统上进行缩放、旋转、组合显示、颜色调整、透明化、长度体积自动测量及模拟裁切等操作,满足术前虚拟手术规划及术中辅助导航的要求。结论:三维图像可提供更加直观的解剖结构,清晰显示肿瘤解剖参数及血供、脂肪等信息,CT三维重建肾肿瘤评价系统可帮助预测肾部分切除术手术难度、围术期并发症等。重建的三维可视化图像导入指定程序或机器人操作系统即可完成虚拟手术及术中辅助导航,帮助手术医师更好地把握手术过程。评分系统所包含的指标及各项指标的分值权重需要通过多中心大样本的研究来证实及完善。