摘要：【目的】建立华山松SSR-PCR最佳反应体系,为华山松种质资源的分子标记辅助育种、遗传多样性分析及遗传图谱构建研究提供理论参考。【方法】以华山松幼嫩针叶为材料,分别采用试剂盒法、SDS法和改良CTAB法提取华山松基因组DNA,确定华山松DNA最佳的提取方法。通过L16(44)正交试验设计对华山松SSR-PCR反应体系中引物用量(A)、dNTP用量(B)、Taq DNA聚合酶用量(C)和DNA模板用量(D)进行优化,获得华山松SSR-PCR最佳反应体系。【结果】改良CTAB法提取的基因组DNA浓度为92.1~1786.3 ng/μL,OD260/OD280为1.80~2.07,OD260/OD230比值约2.0,条带明亮且清晰,无弥散现象,表明该方法提取效果最佳。正交试验极差分析结果显示,4个因素影响华山松SSR-PCR反应体系扩增效果的主次顺序为A>D>B>C,最优水平组合为A4B2C2D2。正交试验方差分析结果显示,4个因素影响华山松SSR-PCR反应体系扩增效果的主次顺序为A>D>C>B,最优水平组合为A4D2C2B2。结合正交试验16个组合的评分结果,最终确定华山松SSR-PCR最佳反应体系(20.00μL):10μmol/L引物0.35μL,50 ng/μL DNA模板1.00μL,10 mmol/L dNTP 2.00μL,5 U/μL Taq DNA聚合酶1.20μL,10×PCR Buffer(含Mg^2+15 mmol/L)2.00μL,用ddH2O补足至20.00μL。【结论】优化获得的华山松SSR-PCR最佳反应体系可应用于华山松种质资源评价及分子标记辅助育种等研究。

摘要：针对高比例新能源接入系统将会面临不断增加的运行备用或者辅助服务的需求量问题,着眼于高比例新能源接入情况下,能量市场和备用市场之间的相互影响对备用决策过程的影响、风力发电参与备用、跨区域备用共享等方面,介绍美国和欧洲典型电力市场的运行经验,为中国未来高比例新能源电力系统的辅助服务市场的设计提供有益的启示。

摘要：大气的光学性质决定了大气辐射平衡;各种先进光电技术的应用场景绝大部分都位于地球大气层内或通过大气路径,相关光电系统的功能受到大气光学特性不同程度的影响.大气光学特性(包括地表的光学特性和天空背景辐射特性)是光波在大气中传播和大气辐射传输研究必需的基础物理性质,在气象、气候和天文观测等基础和应用研究以及自适应光学技术、自由空间光通讯等光电工程应用中具有十分重要的作用.中国的自然环境十分复杂,相应的大气光学特性不能简单的套用国际上其它地区的模式.应进行中国大气光学特性的区域划分,在各个典型地区进行大气光学特性的系统测量和数据分析,对有关大量气象和大气光学特性观测资料进行分析研究,获得各典型地区大气光学特性的统计特征,建立可用于辐射大气传输、光波大气传播研究、光电系统分析与设计等的我国各个典型地区的大气光学特性的统计平均模式,研制光辐射大气传输及其光电应用软件包.

摘要：为了研究分析国内致病性嗜水气单胞菌的毒力因子的分布及与致病性的相关性及其防治,选取5种主要毒力因子气溶素(aerA)、溶血素(hlyA)、丝氨酸蛋白酶(ahpA)、抗金属蛋白酶(ast)、肠毒素(altA)设计5对特异性引物,用PCR方法进行检测,采用急性毒性实验方法测定菌株对异育银鲫的半数致死量(50%lethal dose,LD50),细菌药物敏感试验纸片扩散(K-B)法检测对抗生素的敏感性,结果显示:除菌株Hong12的LD50约为109 cfu,毒力弱外,其他毒力均较强,LD50均在106 cfu左右。aerA、ahpA、hlyA、altA、ast 5种毒力基因的携带率分别为77.8%、88.9%、100%、100%、77.8%。通过比较嗜水气单胞菌毒力基因的分布情况与其对鲫鱼致病性试验结果可以发现,aerA、ahpA为嗜水气单胞菌致病的主要毒力因子,与致病性存在相关性,ast与致病力存在一定相关性,但不是主要毒力因子,hlyA、altA与致病性不存在相关性。9株嗜水气单胞菌对青霉素、羧苄青霉素、万古霉素不敏感,对复合磺胺、头孢噻肟、利福平中毒敏感,对呋喃妥因、氯霉素、四环素、氧氟沙星高度敏感。

摘要：牛嵴病毒(BKoV)可能是与犊牛腹泻相关的潜在病原,为建立快速检测BKoV的方法,本研究根据BKoV 3D基因的保守序列,设计特异性引物对,通过优化反应条件和体系,建立了基于EvaGreen染料检测BKoV的实时定量PCR方法。该方法Ct值与模板在1.08×10^(2)~1.08×10^(8) copies/μL范围内线性关系良好,扩增效率为106.4%;该方法仅检测BKoV时结果呈阳性,检测其他犊牛腹泻相关病原时结果呈阴性;能检出BKoV的最低检出限为10.8 copies/μL;批内和批间的变异系数均小于2%,重复性好。用该方法对311份采自河南、山东和四川省的犊牛腹泻样本进行检测,河南省BKoV的检出率为7.38%(20/271),其他两省的样本均未检测出BKoV。本研究建立的方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BKoV的检测和流行病学调查提供了有力手段。

摘要：目的:探索6~11月龄婴儿配方奶粉中蛋白质适宜水平。方法:采用非线性规划模型分析6~11月龄人工喂养婴儿膳食蛋白质摄入达到平均需要量时,婴儿配方奶粉中蛋白质水平,并利用蛋白质消化率校正的氨基酸评分(PDCAAS)评价婴儿膳食蛋白质质量。数据来源于2013年中国居民营养与健康状况监测。结果:研究纳入104名6~11月龄人工喂养婴儿,每日配方奶粉摄入量的中位数为63.3 g。每100 g配方奶粉中蛋白质含量为10.8~12.0 g时,可以使98%的6~11月龄人工喂养婴儿膳食蛋白质能量密度达到平均需要量水平。蛋白质浓度为10.8 g/100 g配方奶粉时,加入不同氨基酸组成设计的配方奶粉后,6~11月龄婴儿膳食PDCAAS中位数由0.80最高升至0.91,人群中有限制氨基酸的比例由84.6%最低降至61.5%。结论:每100 g配方奶粉中蛋白质含量为10.8~12.0 g时,可以保证6~11月龄人工喂养婴儿膳食蛋白质摄入充足,同时对其膳食蛋白质质量有一定改善。

摘要：工业企业搬迁后遗留的场地大多污染严重,潜在环境风险很高,场地土壤中的污染物具有持续时间长、污染隐蔽、无法被生物降解的特点,被环境学界喻为"化学定时炸弹"。文章根据我国的污染场地现状,分析了污染场地管理存在的问题,提出了切实改善我国污染场地土壤环境质量的对策。

摘要：以工业废弃物剑麻茎为材料,通过正交试验设计,研究剑麻酒酿造的最佳发酵条件。结果表明,将高温蒸煮过的剑麻茎打碎后,添加0.4%的α-淀粉酶,在65℃、p H 6.4条件下进行液化处理2 h;然后添加0.4%的糖化酶,在60℃、p H 4.5的条件下进行糖化处理4 h;最后添加0.8%的安琪酿酒曲和0.8%的安琪高活性酿酒酵母,在p H 6.5、28℃下进行发酵20 d,一次蒸馏得到15°左右的独特香味的剑麻酒。

摘要：目的研究一种综合考虑陆上环境与舰船环境多应力下的舰载导弹弹上计算机加速寿命试验方法,能更具代表性和真实性地描述产品在综合环境条件下的环境应力,进而为环境应力剖面尽可能准确地折算为加速应力剖面奠定基础。通过加速寿命试验,将产品贮存时间加速至目标年限,验证与评估产品剩余贮存寿命。方法针对舰船工作环境条件,从搭载研究对象的舰船出海海况入手,利用海况与舰船振动量值的对应关系,确定舰船振动应力。结合考虑综合环境下的其他应力,研究出一种结合温度-振动-电应力等环境条件的加速试验方法,以已经达到设计贮存寿命期限的舰载导弹弹上计算机为试验对象,开展温度-振动-电应力综合加速寿命试验。结果通过运用温度-振动-电应力的加速寿命试验方法,验证和评估了某型舰载导弹弹上计算机具备延寿至目标年限的剩余贮存寿命,取得了良好的试验效果。结论根据舰船工作环境对贮存寿命的影响,针对性地研究了舰船振动加速试验,给出一个更加贴合实际寿命的寿命评估结果,为后续延寿研究工作提供了可靠依据。

摘要：目的构建小鼠Cchl1a3基因R528H突变型基因敲入打靶载体,模仿低血钾周期性麻痹患者中的对应发现。方法采用置换型载体,分为长短、短臂设计(1.5～2.0kb),以便用聚合酶链反应(PCR)方法筛选中靶载体和ES细胞(embrgonic stem cell)。首先以Cchl1a3基因为模板设计引物,并引入与质粒内插入位点酶切序列相配的内切酶序列,扩增用于套取的同源臂a和b,以及用于插入筛选基因和实行定点突变的同源臂c和d,c和d首尾相接,用点突变特异性PCR在c内实现R528H突变。将a和b定向插入pBR322,借助于温度敏感的pSC101-BAD-gba-(tet)质粒的表达Red/ET重组酶,使其与携带Cchl1a3基因的细菌人工染色体(BAC)实现同源重组,套取含目的突变点、长约8kb的Cchl1a3的基因片断,形成pBR322-Cchl1a3。将c和d定向插入PL451质粒Frt-Neo-Frt片段两侧,酶切c-Frt-Neo-Frt-d片断纯化后,再与pBR322-Cchl1a3质粒一同转入含Red/ET重组酶基因的大肠杆菌EL250菌株,在重组酶的催化下再次实现同源重组,在Cchl1a3基因的给定位点实现R528H突变并插入包含筛选基因和重组酶识别位点的Frt-Neo-Frt片断,完成载体的构建。载体构建过程中,酶切位点变化导致的片断程度改变作为初筛,PCR产物测序结果作为最后的鉴定依据。结果打靶载体符合设计要求。结论运用点突变特异性PCR,结合Red/ET重组技术构建基因定点突变的基因敲入型打靶载体,在重组酶催化下仅需要2次同源重组即可完成。该策略成熟简便,省时省力,构建的载体易于鉴定。