摘要：【目的】合理的土壤磷素管理对作物生产和环境保护具有重要意义。南方双季稻田土壤磷素特征及磷素吸收信息相对缺乏,本文利用江西省稻田土壤质量演变定位监测试验为平台,系统分析长期不同施肥措施下土壤全磷、磷活化系数及水稻磷素吸收量的变化特征和全磷与磷盈亏的响应关系等,为指导磷肥合理施用提供重要科学依据。【方法】从1984年开始在江西省南昌市进行长期定位试验,设置8个处理,分别为不施肥对照(CK),PK、NP、NK、NPK、70%化肥氮+30%有机肥氮(70F+30M)、50%化肥氮+50%有机肥氮(50F+50M)、30%化肥氮+70%有机肥氮(30F+70M)。早稻施用纯N、P2O5和K2O量分别为150、60和150 kg/hm^2,晚稻分别为180、60和150 kg/hm^2。早、晚稻施用的氮、磷、钾化肥均分别为尿素、过磷酸钙和氯化钾,有机肥分别为紫云英(N、P2O5、K2O含量分别为0.30%、0.08%、0.23%)和腐熟猪粪(N、P2O5、K2O含量分别为0.45%、0.19%、0.60%)。除30F+70M处理,其余处理均为等氮磷钾设计。于1984-2012年每年早、晚稻收获期采集秸秆和稻谷计产,并于晚稻收获后,测定土壤全磷和有效磷含量。分析土壤全磷、磷活化系数(PAC)及早、晚稻磷素吸收量随种植年限的变化规律,研究土壤全磷含量与磷累积盈亏的响应关系。【结果】经29年连续试验,NK处理土壤全磷含量以每年4.6 mg/kg的速度下降,而含磷化肥处理土壤全磷含量升高速率为3.3~19.4 mg/(kg·a)。有机无机配施处理(70F+30M、50F+50M和30F+70M)升高速率平均为16.1 mg/(kg·a),是施NPK肥处理的4.89倍。施磷土壤全磷含量平均增至1.07 g/kg (2010-2012平均值),较初始值提高了1.18倍。不施磷肥处理土壤磷活化系数(PCA)由试验初始的4.24%下降至2.5%左右,施磷肥处理则均显著升高,其中有机无机配施处理平均升高至8.51%,平均年升高速率是施NPK处理的2.89倍。早、晚稻磷素吸收量,施磷肥(PK、NP和NPK)和化肥配施有机肥处理(70F+30M、50F+50M和30F+70M)均显著高于CK,提高幅度分别为29.9%~124%和28.6%~103%,均衡施肥(NPK、70F+30M、50F+50M和30F+70M)磷素吸收量显著高于不均衡施肥(PK和NP)处理,前者平均分别较后两者提高了38.7%和32.9%。早、晚稻产量与磷素吸收量呈极显著线性正相关关系,每吸收磷(P) 1 kg,早稻和晚稻产量分别可提高115和106 kg/hm^2。不施肥(CK)条件下,土壤全磷变化与累积磷盈亏间无显著相关关系,施NK肥处理土壤中每亏缺磷100 kg/hm^2,土壤全磷含量降低6.0 mg/kg,施化学磷肥的3个处理,土壤中每盈余磷100 kg/hm^2,平均提高9.3 mg/kg,而3个有机–无机配施处理,土壤中每盈余磷100 kg/hm^2,平均增加63.3 mg/kg,是无机磷肥的6.78倍。【结论】无论是单施化学磷肥,还是有机无机配施均有效提高土壤全磷含量及磷活化系数,且在等磷量投入条件下,有机无机配施较单施化肥的效果更优。建议减少中国南部红壤性稻田土壤的总磷输入量和提高有机肥施用比例,以改善粮食生产和保护环境。

摘要：目的观察以DNA甲基转移酶1（DNA methy transferas 1，DNMT1）基因为靶基因的RNA干扰对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响。方法设计、合成针对DNMT1基因的siRNA和阴性对照siRNA（N—siRNA）。实验分为空白对照组、脂质体组（仅予脂质体）、N—siRNA组（转染30 nmol N-siRNA）、siRNA组（转染30 nmol siRNA）。siRNA转染48h后，实时PCR法检测DNMT1 mRNA水平；WST-8法检测细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果siRNA组DNMT1mRNA的抑制率为（86．0±4．3）％，明显高于N—siRNA组的（40．1±2．2）％和空白对照组的0（P〈0．01）；细胞存活率为（47．6±5．6）％，明显低于N—siRNA组的（68．1±4．1）％和空白对照组的100％（P〈0．01）；细胞凋亡率为（14．94±2．89）％，明显高于空白对照组的（7．51±1．12）％、脂质体组的（7．06±0．39）％、N—siRNA组的（8．84±1．44）％（均P〈0．01）。结论siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1 mRNA的表达，同时抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。

摘要：[目的]研究乙型肝炎病毒（HBV）基因型对应的BCP区变异与肝细胞癌（HCC）发生之间的关系。[方法]采用队列研究设计,对慢性HBV感染者进行随访观察,采用多重PCR法和巢式多重PCR法进行HBV基因型分型。变异检测采用PCR扩增后测序。[结果]HBV基因型B感染者平均随访8.52（IQR：6.67~10.75）年,HCC发生率为6.55/1 000人年,HBV基因型C感染者平均随访8.87（IQR：6.85~11.33）年,HCC发生率为11.63/1 000人年,两组之间差异有统计学意义（P=0.006）。HBV基因型B感染者中,年龄（≥60岁）、肝硬化能够增加HCC发生的危险性;HBV基因型C感染者中,男性、年龄（≥40岁）、肝硬化、C1653T、T1753V、A1762T/G1764A突变能够增加HCC发生的危险性,干扰素治疗能够降低HCC发生的危险性。在HBV基因型C感染者中,对于发生A1762T/G1764A突变（HR=0.21,P=0.008）和未发生C1653T（HR=0.17,P=0.013）、T1753V（HR=0.08,P=0.012）突变者使用干扰素治疗能够显著降低HCC发生的危险性。[结论]HBV基因型及变异与HCC发生密切相关。HBV基因型C感染者中,发生A1762T/G1764A突变者应优先接受抗病毒治疗;而发生C1653T和T1753V突变者应该密切进行监测以早期发现HCC,尽早手术切除。

摘要：结合具体的施工实践,介绍了在平原地区采用钢拱架对大跨度桥梁进行拼装的方法,从钢拱架设计计算、钢拱架拼装吊装等方面作了阐述,实践证明了自锚式系杆拱桥施工在平原地区的可行性。

摘要：目的运用降落聚合酶链反应(touchdown PCR,TD-PCR)技术快速从腹泻、手足口病人粪便标本中同时检测诺如病毒(Norovius,NV)、肠道病毒71型(Enterovirus 71 EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16),并评价该技术用于检测这3种病毒的效能和敏感性。结论根据touchdown PCR原理设计TD-PCR程序,试验选择最佳反应条件,与普通PCR扩增效果进行评价。用10倍稀释检验TD-PCR方法的灵敏度,并用轮状病毒、札幌病毒、星状病毒、伤寒杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、香港海鸥形菌检测该方法的特异性。结果 TD-PCR能在一个反应条件下同时检测NV、EV71和CoxA16,扩增片段条带清晰,检测效果明显优于普通PCR,测序证实了3组片段的特异性,3种病毒cDNA的最低检测浓度分别为4.775μg/ml、2.360μg/ml、43.273μg/ml。检测该方法特异性时,其他病原体未见特异性条带扩增。结论成功建立的TD-PCR方法可同时检测腹泻和手足口病人粪便中NV、EV71和CoxA163种病毒,为快速检测相关病原体、科学防治腹泻和手足口病疫情暴发提供了可靠手段。

摘要：【目的】明确斜带石斑鱼(Epinephelu coioides)BAG-1基因(EcBAG-1)的结构特征、组织表达分布及在脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(Polyi:C)刺激后的表达变化,进一步揭示鱼类BAG-1在病原感染中的作用机制,也为了解鱼类的抗病免疫提供参考依据。【方法】依据EcBAG-1基因EST序列设计特异性引物克隆EcBAG-1基因,通过SMART、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL、ExPASy、ClustalX及MEGA 5.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测EcBAG-1基因的组织表达特征及其在LPS和Polyi:C刺激后的表达模式。【结果】克隆获得的EcBAG-1基因开放阅读框(ORF)长624 bp,共编码207个氨基酸残基;EcBAG-1蛋白分子量为49.84 kD,理论等电点(pI)为5.18,为疏水性蛋白。EcBAG-1蛋白具有BAG-1家族保守的BAG结构域和UBQ泛素相关结构域,无跨膜结构域,主要分布在细胞质和细胞核,其二级结构中α-螺旋占65.22%、延伸链占10.63%、无规则卷曲占20.29%、β-转角仅占3.86%。EcBAG-1氨基酸序列与大黄鱼的BAG-1氨基酸序列相似性最高(96.62%),亲缘关系最近;与原鸡和热带爪蛙的亲缘关系相对较远,对应的BAG-1氨基酸序列相似性分别为58.45%和57.50%。EcBAG-1基因在斜带石斑鱼的肝脏、胸腺、脾脏、头肾、鳃、皮肤、肌肉、大脑、外周血淋巴细胞及心脏等组织中均有表达,且以在大脑中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P>0.05,下同);经LPS和Polyi:C刺激24 h后,斜带石斑鱼脾脏中的EcBAG-1基因相对表达量显著上调。【结论】EcBAG-1蛋白含有BAG-1蛋白家族典型的BAG结构域和UBQ结构域,具有与哺乳动物BAG-1相似的生物学功能,即EcBAG-1基因在斜带石斑鱼抵御细菌/病毒感染的过程中发挥重要作用,为深入了解鱼类的抗感染机理拓宽了思路。

摘要：目的观察DNA甲基转移酶1（DNMTl）基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH·1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响。方法由美国Ambion公司设计合成DNMTIsiRNA和阴性对照siRNA，分别用15、30nmol／L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞，以未转染组细胞作为对照。应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMTlmRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1mRNA的表达。结果转染48h后，DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMTlmRNA表达量分别为0．573±0．026和0．143-3-0．044，显著低于对照组的1．020±0．217及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．900±0．475和0．938±0．327（P值均〈0．05）；DNMTlsiRNA组的DNMTl蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组。DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMT活性分别为0．364±0．124和0．250±0．072，明显低于对照组的0．931±0．065及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．665±0．055和0．472±0．040。DNMT活性与DNMTlmRNA表达呈正相关（r=0．69，P〈0．01）。DNMTlRNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化。结论DNMTlsiRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMTl基因的表达，明显抑制DNMT的活性，并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化。

摘要：目的将shRNA稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F中,使得氯离子通道蛋白1(CLIC1)基因表达抑制,观察肿瘤细胞的增殖、细胞周期、凋亡情况以及迁移能力的变化。方法设计并合成理论上最佳的shRNA序列,进而将其插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,经测序和双酶切验证载体构建成功后以梭华-Sofast将DNA质粒稳定转染至小鼠肝癌细胞株Hca-F中,经Real-timeRT-PCR验证CLIC1mRNA表达下调后,应用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测干扰前后的Hca-F细胞,对比观察细胞的增殖、细胞周期和凋亡情况的变化,应用Transwell小室检验其迁移能力的变化。结果 pGPU6/GFP/Neo-shRNA对CLIC1mRNA抑制效果明显,抑制率达57%。经该表达质粒的干扰后,Hca-F细胞的增殖能力明显增强,停留于G2/M期的细胞明显增多,凋亡细胞显著减少,Transwell小室中穿膜细胞数量明显减少。结论 CLIC1基因具有抑制小鼠肝癌细胞的增殖和促进其凋亡的作用,并且参与细胞周期中G2/M期的调节,同时能够促进肿瘤细胞的迁移。

摘要：在GenBank中搜寻虹彩病毒蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)基因序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列,设计引物和Taqman探针,建立了虹彩病毒蛙病毒属实时荧光PCR检测方法。对荧光PCR反应条件进行优化,评估该检测方法的特异性、稳定性和重复性,利用10倍系列稀释法检验其灵敏度并与常规PCR做了比较。结果显示,该方法对虹彩病毒蛙病毒属成员(新加坡石斑鱼虹彩病毒除外)的检测有高度的特异性,与淋巴囊肿病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒等其他水生动物病毒之间均无交叉反应,有良好的特异性,检测总DNA灵敏度为4.5×10-3pg/μL,比传统PCR的敏感度高出100倍,可对低病毒含量的样品进行准确检测。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.9984。组内和组间重复试验的Ct值标准偏差分别为1.2%和1.6%,有良好的重复性。与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品等优点,可用于出入境检疫和动物防疫监督部门对虹彩病毒蛙病毒属的疫情监测。

摘要：目的:探讨类风湿关节炎(RA)发病与季节和地域因素的相关性,为RA防治提供证据支持。方法:设计RA病证规律调查表,对华北、东北、华东、西南、西北、中南6个地区18家研究中心收集的1 602例RA患者进行横断面调查分析。结果:RA发病以春季最为多见,占36.33%,其次为冬季和夏季,分别占26.22%和25.53%。秋季发病最少,占11.92%,各季节发病率具有显著差异(P<0.01)。除西南地区外,全国其他各地区,均以春季发病最为常见,春、夏、冬季发病率在各地区间具有显著性差异(P<0.05),西南地区RA以冬季高发,全国所调查地区均以秋季发病最少。结论:RA的发病具有明显的季节性和地域性差异。