摘要：根据G enB ank收录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株ORF 6和ORF 7基因序列,用O ligo软件设计并合成大小为37 bp的寡核苷酸探针,经生物素标记后,成功建立了原位检测石蜡组织切片中PRRSV核酸的方法。该探针能检测到56 pg PRRSV核酸的RT-PCR产物DNA,能特异检测出PRRSV核酸及其PCR产物,而对猪瘟病毒(HCV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪乙脑病毒(JEV)的核酸呈阴性反应。应用该方法检测PRRSV SC-1株人工感染的28日龄仔猪,在感染后7 d即可在肺脏、肾脏、扁桃体、胸腺、肺门淋巴结、十二指肠和大脑检测到PRRSV核酸。该法可用于仔猪PRRSV感染的诊断和组织中核酸的定位及分布研究,也可用于甲醛固定组织的回顾性诊断。

摘要：新型冠状病毒感染人体后可引起发热、咳嗽等呼吸道症状,重症者可发生新型冠状病毒肺炎、严重急性呼吸综合征、甚至死亡。因此,快速、准确的识别新冠病毒的感染者,对于阻止病毒的持续传播非常重要。目前,新冠病毒抗原检测试剂产品大多以单个新冠病毒的N蛋白为目标抗原,存在一定的假阴性情况,本研究使用可识别多个新冠病毒结构蛋白抗原表位的多抗建立了一种双抗夹心ELISA方法,有望提高新冠病毒抗原检测的敏感性。利用课题组前期设计的一种新冠病毒抗原表位融合蛋白作为免疫原,搭配弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,分析兔血清抗体的分泌情况及效价。利用制备的兔源多抗作为捕获抗体,以HRP标记的兔源多抗作为酶标抗体,建立一种用于检测新冠病毒抗原的双抗夹心ELISA检测方法。分别确定最佳捕获抗体、酶标抗体的稀释度以及最佳封闭液种类、封闭时间,初步评价方法的灵敏度和特异性,并比较不同样品储存条件对该ELISA方法检测效果的影响。新冠病毒抗原表位融合蛋白免疫兔后产生了高效价的特异性抗体,经纯化获得了相应的多抗。所建立的双抗夹心ELISA方法具有较好的检测限和线性范围,与常见的呼吸道病原体无交叉反应,有望用于新冠病毒的抗原检测。

摘要：肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)是重要条件致病菌之一,它是社区获得性和院内感染相关的重要病原体,可导致肺炎、尿路感染、败血症、肝脓肿等。目前KP多重耐药问题严峻,开发疫苗预防其感染尤为必要。外膜蛋白是肺炎克雷伯菌的主要毒力因子之一,OMPA、OMPN、CusC富含大量保守区,是研制KP疫苗的理想候选蛋白。该研究通过原核系统表达重组肺炎克雷伯菌抗原表位融合蛋白,并对其免疫原性进行验证。通过计算机分析筛选出KP外膜蛋白OMPA、OMPN、CusC高度保守的抗原表位,将多个表位串联成融合蛋白,构建大肠杆菌重组系统表达KP融合蛋白,用镍离子螯合层析技术纯化目的蛋白,蛋白配伍不同的佐剂分组免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及相关细胞因子水平以评价融合蛋白诱导的体液免疫和细胞免疫效果,对比各组之间免疫效果的差异,筛选最佳免疫方案。表达出的重组融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经变复性处理后得到可溶性的融合蛋白;重组融合蛋白免疫小鼠后产生了高效价特异性抗体,搭配佐剂可以提高抗体效价,其中MF59佐剂和CpG佐剂增强作用最好,其次是铝佐剂;免疫后的小鼠可产生细胞免疫,搭配佐剂可以提高细胞免疫的效果,其中MF59佐剂的促进作用最优,其次是CpG佐剂,再者是铝佐剂。本研究设计的肺炎克雷伯菌融合蛋白具有良好的免疫原性,能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,搭配佐剂可显著增强免疫效果,为亚单位疫苗的研制奠定了基础。

摘要：介绍了一种结合FPGA硬逻辑的高速数据处理能力和ARM的高效数字功能扩展能力,实现实时高速电力谐波检测的"FPGA+ARM"硬件新构架.这种新架构采用复用逻辑及流水线技术在FPGA上实现了A/D采样控制、加窗、FFT及模平方等运算.采用uClinux为操作平台在ARM处理器完成对FPGA的现场配置、数据通信处理及人机交互接口等功能.实际应用表明,这种架构可较好地解决电力谐波检测中的"实时性与精确度的矛盾".

摘要：通过调研合肥市中小型制造业企业的发展概况,分析总结了中小型企业对信息共享平台的需求,构建了基于Web GIS的信息共享平台,并具体进行了数据库的设计和功能实现,从而实现了中小企业间信息资源的共享,优化了企业资源配置,提高了企业市场响应能力。

摘要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)LV和VR-2332株的核苷酸序列,设计合成了1对特异性引物,对PRRSV四川分离株SC1和SC2进行RT-PCR,扩增出病毒ORF5基因。利用真核表达质粒pcDNA3.1(+)成功构建了PRRSV四川分离株ORF5基因疫苗pcDNA-PRRSV-SC1-ORF5和pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5。通过脂质体转染法和电穿孔转染法将pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5转染Marc-145细胞,间接免疫荧光技术跟踪监测ORF5基因的表达情况,结果表明,脂质体转染法和电穿孔转染法分别在转染26 h和23 h后检测到ORF5基因特异性表达产物,且随着培养时间的延长,特异性表达产物增多,两者均在56 h达到高峰;这证明pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5在Marc-145细胞中已高效表达,为PRRSV基因疫苗在临床上应用提供了实验依据。

摘要：为了解决网络安全实验受到硬件条件和虚拟化技术限制的问题,设计实现了基于Open Stack的网络安全实验平台。该平台采用抽象分层模式,通过整合实验项目设计虚拟网络拓扑结构,并在Open Stack中使用SDN网络虚拟化技术搭建。通过教学实践表明,该平台具有真实性、可编程性、隔离性和扩展性等特点,为用户提供了一个良好的网络安全实验教学环境,具有一定的研究和应用价值。

摘要：通过比较293T细胞的接种密度、质粒DNA的量以及CO2浓度对磷酸钙转染方法的影响,确定最佳的转染条件.以各单因素试验的最适条件为依据,设计三因素三水平的正交试验.结果表明,磷酸钙介导质粒DNA转染,当293T细胞的接种密度为5×105/mL、质粒DNA的量为30μg、细胞培养环境CO2浓度为3%时,转染效果最佳.

摘要：选定影响土壤蒸发能力的17项气象影响因子并进行不同尺度的观测,获得日实测数据,同时将日序数也列入分析范围。运用主成分分析法分析与沙地土壤蒸发能力有关的18个气象因子的主成分,给出了一种应用于水文上的信息浓缩及指标简化的研究方法;同时利用实测数据分析了沙地土壤蒸发的特点。结果表明:①埋深距地面0.05 m、0.15 m地温、高距地面为3.5 m气温、埋深距地面0.20 m地温及高距地面为2.0 m气温,这5个系列与土壤蒸发量的相关性最不显著,因此首先将其舍弃;②从单个影响因子来看,距地面高2.0 m处的风速和湿度对土壤蒸发能力的影响最为显著,他们的因子载荷量均达到了0.94,而Φ20 cm型水面蒸发的载荷量相对最小,载荷量为80%;③与草甸子地的日土壤蒸发相比沙地的日土壤蒸发量均较大,这可能是由于沙地的日温度极值差较草甸子地大的缘故。

摘要：目的利用TaqMan PCR技术,建立乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)实时荧光PCR检测方法,初步应用于蚊虫媒介的JEV监测。方法根据GenBank发表的JEV全基因组序列资料分析结果,在其NS5基因区段设计JEV特异的引物与探针;优化Mg2+浓度和引物浓度比例,并利用11株JEV和7株相关病毒株考核检测体系的保守性、特异性、灵敏性和稳定性;利用体外转录的病毒RNA和定量的病毒样品,建立相应的定量分析模型;初步应用于蚊虫媒介的监测与检测分析。结果Mg2+优化浓度为5mmolL,上下游引物浓度比例为4∶1,引物探针具有良好的保守性和特异性,灵敏度为10PFUml,稳定性分析表明,同一样品Ct值的重复检测5次,变异系数均小于5%;绘制两种标准曲线,构建了JEV基因拷贝数、病毒滴度为分析指标的定量分析模型,检测蚊虫标本结果显示,TaqMan PCR方法较病毒分离法敏感、快捷、简便。结论本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的JEVTaqMan PCR检测方法,为蚊虫媒介检测奠定了基础,为乙型脑炎的预防控制和脑炎相关疾病的诊断与鉴别诊断提供了一种技术手段。