摘要：为了改进骨髓移植中供、受体配型技术,在已有技术的基础上改进、建立了新的HLA-DQB1-PCR-SSP方法。利用澳大利亚皇家医院赠送的HLA标准分型细胞对自行设计引物的特异性进行鉴定,发现该引物设计合理、扩增特异。通过内部阳性对照引物的设立,可较容易地将纯合子及杂合子分型细胞分开,并对个体DNA进行了尝试。结论表明,HLA-DQB1-PCR-SSP快速、简便、灵敏、重复性好,结果易于判断,适于小样本及急症病人的器官及骨髓移植配型,是比较理想的HLA-Ⅱ类基因分型方法。

摘要：目的:对胀果甘草甘草苷生物合成途径的关键酶查尔酮异构酶(CHI)进行基因克隆及序列分析。方法:根据乌拉尔甘草CHI基因c DNA序列设计引物,以胀果甘草主根总RNA为模板RT-PCR扩增CHI基因c DNA序列,并对其进行分析。结果:克隆得到20条胀果甘草CHI基因c DNA序列,开放读框全长690 bp,编码229个氨基酸残基。20条胀果甘草CHI基因的c DNA序列存在22个变异位点,一致性为99.54%,可分为6种单倍型;其编码的氨基酸序列存在14个变异位点,一致性为98.98%。胀果甘草CHI基因编码蛋白为稳定性亲水蛋白,相对分子质量为24.5×103,等电点为5.3~6.2,不含信号肽,无跨膜区,二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,保守结构域包含一个查耳酮超家族结构域。同源性分析显示,不同物种间的CHI基因同源性较低。结论:克隆了胀果甘草CHI基因c DNA序列,为进一步研究不同基原甘草中甘草苷生物合成的分子调控机制奠定了基础,并为优质甘草的分子选育提供了理论依据。

摘要：目的探讨致病性大肠埃希菌(EPEC)中高致病性毒力岛(HPI)irp2基因与致病性的关系。方法根据Genebank中irp2基因设计特异性引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增基因全长,克隆入pUCm-T载体,并通过酶切和测序鉴定。结果160株EPEC中有16株(10.00%)扩增出278bp基因片段,该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPIirp2基因的同源性高达97%以上。结论部分EPEC具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列,该毒力岛可能与EPEC的致病性有一定相关性。

摘要：为评价水力割缝技术在余吾煤矿高瓦斯厚煤层的可行性,在该矿N2203底抽巷采用压降法测试分析了3号煤层的水力割缝有效影响半径。设计了测试方法和钻孔参数,计算确定了施工完水力割缝孔并封孔抽放后40 d为有效测试时间。现场测试结果分析发现,在孔径为94 mm,抽采负压为13 k Pa时,余吾煤矿3号煤层的瓦斯抽采影响半径在封孔抽放18 d后为2 m,25 d后为4 m,45 d的时候接近6 m。

摘要：对串联战斗部前级聚能装药开孔不大的问题开展了研究,提出了一种M型药型罩,通过分析该药型罩结构设计的原理,运用ANSYS/LS-DYNA仿真软件对该药型罩形成环形聚能射流进行了数值模拟研究。结果表明:M型药型罩能够形成直径较大的环形射流,射流持续稳定;军用领域,能够用作串联战斗部的前级药型罩,对靶板切割成一定孔深且孔径大的环形孔,方便后级随进战斗部对靶板形成充塞破坏;民用领域,可以对一定厚度的靶板进行快速打孔。

摘要：目的建立实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time recombinase polymerase amplification,real-time RPA)检测大肠埃希氏菌O157的分析方法。方法根据大肠埃希氏菌O157的rfbE基因(S83460.1),设计特异性引物和exo探针,分别进行引物探针筛选和特异性、灵敏度以及稳定性探究,并对人工污染样品和实际样品进行检测,验证本研究方法的实用性。结果本方法在37℃恒温20 min内可完成对大肠埃希氏菌O157的定性检测,目的DNA的检测限为0.01ng/μL,目的菌的检测限为10~3CFU/mL。在稳定性实验中,选择从100~0.001 ng/μL的10倍梯度稀释的目的DNA进行每个浓度8个平行的测试,0.01 ng/μL及以上浓度的DNA的8个平行均可稳定检出。对于大肠埃希氏菌O157的初始污染量为4 CFU/25 g的牛奶和鸡肉人工污染样品,增菌9 h后,可检出其中的目的菌。用本方法和国标方法GB 4789.36-2016同时检测20份实际样品,结果一致。结论该方法快速、简便,可作为一种常温下大肠埃希氏菌O157的快速检测手段,应用于基层实验室或现场检测。

摘要：目的建立一种简便、快速和高敏感度的蚊体内间日疟原虫检测的环介导等温扩增方法(LAMP)。方法针对间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因种属特异性保守区域6个位点设计2对引物,以感染性按蚊、阴性按蚊、恶性疟原虫及正常人血DNA为模板评价LAMP的特异性。将间日疟原虫CSP基因质粒DNA梯度稀释,并与阴性按蚊DNA按1.0μl加1.3×106、1.3×105、1.3×104、1.3×103、1.3×102、1.3×101、1.3×100拷贝混合后为模板进行LAMP反应,观察其检测敏感性;将感染性按蚊与阴性按蚊DNA作1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256稀释,然后以稀释样本为模板进行LAMP反应,观察批量检测的敏感性。再用此方法与镜检解剖、巢式PCR同时检测同批次人工感染的67只按蚊,评价其应用价值。结果此法检测感染性按蚊阳性,对照组均为阴性;检测不同比例稀释的间日疟原虫CSP基因质粒DNA与按蚊DNA混合物,最低可检测1.3×102拷贝的间日疟原虫CSP基因质粒DNA与按蚊DNA的混合物;检测不同比例感染按蚊与阴性按蚊DNA混合样本,最低可检测出在128个按蚊中有1个感染按蚊的混合样本;用此法检测67只同批次人工感染的按蚊,检出率为47.76%,解剖镜检检出率为25.37%(χ2=7.24,P0.05)。以镜检解剖作为金标准,LAMP敏感性为100%,巢式PCR敏感性为100%。结论LAMP检测蚊体内间日疟原虫简便、快速、敏感性高,具有广阔的应用前景。

摘要：目的:构建针对人CC亚族趋化因子配体20(CC chemokine ligand20,CCL20)基因外显子2的置换型打靶载体。方法:设计和合成引物,利用长距离聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)从永生化人角质形成细胞系(HaCaT)基因组DNA中克隆出CCL20基因组DNA片段,再以CCL20基因为模板扩增出长度为1969bp的同源短臂和2356bp的同源长臂,分别插入ploxP载体的Neo基因上游和下游,构建针对人CCL20基因外显子2的置换型打靶载体(ploxP-hCCL20)。将打靶载体线性化并以电穿孔方法转移入HaCaT,观察克隆的形成。结果:经过PCR、限制性内切酶鉴定及DNA序列测定,证实该载体的两条同源臂包含人CCL20基因的外显子1、3、4及其邻近的部分内含子。结论:ploxP-hCCL20载体构建成功,增加Neo基因下游同源臂长度的策略有可能提高细胞基因敲除的同源重组率。

摘要：以计算地基沉降的角点法为基础,推导出计算砌体承重结构局部倾斜的公式及辅助表格.计算简单、方便,具有一定的实用价值.

摘要：目的:对光果甘草黄酮代谢途径中的关键酶查尔酮异构酶(CHI)进行基因克隆和序列分析。方法:取新鲜光果甘草主根,立即投入液氮,作为提取RNA的植物材料;用植物RNA提取试剂盒提取光果甘草总RNA,用逆转录试剂盒对其逆转录得cDNA;根据文献报道的乌拉尔甘草CHI序列设计特异性引物,扩增光果甘草CHI基因并测序;用生物信息学软件对所得序列进行分析。结果:扩增得到22条光果甘草CHI基因cDNA序列,其编码区全长为690bp,编码229个氨基酸残基。DNAMAN比对表明22条光果甘草cDNA序列间存在16个变异位点,一致性为99.67%,可分为7种单倍型,其中单倍型1为主流单倍型,所占比重为45.5%;氨基酸序列间存在10个变异位点,一致性为99.38%。生物信息学分析表明光果甘草CHI基因编码蛋白为稳定性亲水蛋白,相对分子质量为24 000,等电点为5.56~6.76,不含信号肽,无跨膜区,保守结构域包含一个查尔酮超家族结构域,二级结构以α螺旋和无规卷曲为主。MEGA 5.0同源性分析显示光果甘草7种CHI单倍型间亲缘关系良好且与同属植物乌拉尔甘草的进化关系最近,与蕨类植物香鳞毛蕨的进化关系最远。结论:克隆了光果甘草CHI基因并对其进行了序列分析,为进一步探究CHI基因对甘草苷生物合成的分子调控机制奠定了基础。