摘要：[目的]对MDCht9基因进行生物信息学分析,构建原核表达载体,获得重组蛋白,并测其酶学活性。[方法]构建邻位连接树研究MDCht9基因的分类归属及其与黑腹果蝇、冈比亚按蚊和致倦库蚊几丁质酶的进化关系,采用生物信息学软件,分析MDCht9基因及编码蛋白的理化性质,信号肽、二级结构等,预测蛋白质的功能;根据其c DNA序列设计引物,PCR扩增,以p ET28(+)为载体构建重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)进行诱导,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,质谱鉴定纯化蛋白。几丁质酶活测定:以4MU-(Glc NAc)3为底物,测定重组蛋白的酶学活性。[结果]系统发育树表明MDCht9基因与果蝇Cht9基因同源性最高,其ORF全长1 401 bp,编码466个氨基酸,理论分子量为50 827. 2 Da,等电点为6. 97,属于亲水性蛋白。MDCht9基因编码蛋白的第1-22氨基酸为信号肽,剪切位点位于第22与第23位氨基酸之间。MDCht9蛋白的功能结构域位于第24-357位氨基酸间,是18家族几丁质糖基水解酶的催化域,第413-466位氨基酸之间的序列为几丁质结合区域。MDCht9蛋白的二级结构及三级结构显示有3种类型:以无规则卷曲为主(Cc),其次为α-螺旋(Hh)和β折叠(Ee)。构建了具有正确序列的MDCht9重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;通过亲和层析柱纯化的重组蛋白质谱鉴定,与MDCht9序列一致,提示MDCht9重组蛋白获取成功。酶学活性表明不同浓度的MDCht 9重组蛋白均有几丁质酶活性,而且呈现一定的量效关系,0. 18 mg/m L重组蛋白的4 MU生成量为53. 63 U,0. 045 mg/m L重组蛋白的4 MU生成量为9. 97 U。[结论]采用原核表达系统成功获得MDCht9的重组蛋白,且重组蛋白有较强的酶活性,为进一步研究其功能奠定了基础。

摘要：面对信息化时代带来的机遇和挑战,科技期刊如何应对,以适应潮流的发展,满足更多科技工作者的需求,抓住广大读者的需求,近而提升科技期刊的影响力。文章通过对《航天器工程》期刊编辑部信息化建设和网络建设,结合实践经验,对科技期刊信息化建设进行了分析。

摘要：为解决色素辣椒优质高产问题,以色素辣椒品种‘0409’为试材,采用裂区试验设计,通过多重分析法研究密度[82500株/hm2(A1)、67500株/hm2(A2)、52500株/hm2(A3)]和行距(70 cm+50 cm、60 cm+60 cm、80 cm+40 cm)互作对色素辣椒产量及相关性状的影响。结果表明,不同密度、相同行距处理下,色素辣椒生物产量和果实产量均随密度增加而递增(A1>A2>A3)。同一密度、不同行距处理下,均以行距80 cm+40 cm的生物产量和果实产量最高,其次为行距70 cm+50 cm,并且A1高密度下3种行距配植差异显著。随密度的增加,果长、果肩径、单果重、单株果重以及商品果数等产量性状均逐渐减小,但除单株果重,其他性状差异不显著。商品果数(0.8357*)、单果重(0.8196*)和果肩径(0.7681)与果实产量的相关系数较大,而株高(-0.8394*)与果实产量呈显著负相关。多元逐步回归分析得出,株高、果肩径、单果重以及商品果数是影响果实产量的重要指标,相关系数R=0.9998。将相关指标进行主成分分析得出,前2个主成分累计贡献率95.91%,其反映的信息与色素辣椒产量及相关性状的相关分析和通径分析结果基本一致。综上所述,高密度82500株/hm2、行距80 cm+40 cm为色素辣椒最佳栽培方式,群体增产潜力最大。

摘要：目的探讨饮用绿茶和2型糖尿病（T2DM）的关系。方法采用多阶段整群随机抽样，抽取徐州市25岁及以上常住居民26828人。通过横断面调查，采用自行设计的调查问卷收集研究对象一般人口学特征，疾病史和家族史，饮食、生活行为方式和饮茶史，并进行体格检查；利用χ^2检验或Z检验进行组间比较，通过多因素logistic回归进行统计学分析。结果徐州市居民T2DM患病率为6．50％，饮用绿茶率为18．27％；调整了年龄、性别、家族史、慢性病史及体质指数等多因素后，饮用绿茶对2型糖尿病的OR（95％CI）为0．62（0．51，0．89）；其中，男性饮用绿茶对2型糖尿病的OR（95％CI）为0．61（0．43～0．87），女性饮用绿茶对2型糖尿病的0R（95％CI）为0．64（0．53—0．91）。随着饮用频次和杯数的增加，患T2DM的风险性降低。结论饮用绿茶和T2DM之间呈现负性关联，能够降低T2DM的患病风险，饮茶的频次与T2DM的患病之间存在着剂量反应关系。

摘要：目的优化复合动植物蛋白乳化剂制备肠内营养乳的处方及工艺,并考察双蛋白乳化剂对营养乳的稳定作用。方法以酪蛋白酸钠和大豆分离蛋白作为乳化剂,采用高压均质法制备双蛋白乳,用正交设计法优化制剂处方,同时考察高压均质参数对乳剂粒径的影响,并对其形态、粒径、Zeta电位、离心稳定性和贮存稳定性进行评价。结果最佳处方为:油含量5%,酪蛋白酸钠1%,大豆分离蛋白1%;优化的均质参数为:一级阀均质压力400 bar,循环均质3次。制得的双蛋白乳平均粒径为(250.36±13.58)nm,多分散系数小于0.2,Zeta电位值为(-44.40±1.20)m V,离心和室温存放6个月后乳滴平均粒径未发生改变。结论以酪蛋白酸钠和大豆分离蛋白作为双蛋白乳化剂可制得稳定性良好的肠内营养乳。

摘要：目的 构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码RNA（lncRNA）的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病（HVOD）肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法 采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小鼠尾进行基因组DNA的提取,通过PCR扩增出0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠的1 000 bp基因序列,并连接入经BamHⅠ/Nhe Ⅰ双酶切后的腺病毒穿梭载体GV359;竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与辅助包装质粒pBHG共转染HEK293细胞,并对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒进行包装、扩增,采用氯化铯（CsCl）不连续密度梯度离心与连续密度梯度离心2个步骤对重组腺病毒进行浓缩纯化,并对重组腺病毒滴度进行测定;测定不同感染复数（MOI）竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35的感染效率,并采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blotting对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35与同步培养的对照肝细胞中竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段、Notch1 mRNA及0610009E02Rik lncRNA相对表达水平及其蛋白表达水平,并进行统计学分析.结果 ①经基因序列比对分析发现0610009E02Rik与Notch1的第34个外显子存在分子量为1 000 bp的重叠序列,依据0610009E02Rik与Notch1基因序列设计含BamH Ⅰ/Nhe Ⅰ酶切位点特异性引物,通过PCR扩增出片段长度为1 000 bp的0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠序列的竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段,DNA测序结果显示竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与理论预期序列构建成功.②将竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体转染HEK293细胞后第12天,约90％细胞出现细胞病变（CPE）,收集细胞获取病毒液.浓缩纯化病毒液经梯度稀释在感染HEK293细胞后第10天,于显微镜下观察稀释梯度1∶ （10～1010）均出现CPE,病毒滴度约为5.01×109 PFU/mL.③当竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒MOI为80,感染肝细胞株H2.35 48 h后感染效率高达95％.收集经竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染后肝细胞,通过RT-PCR检测竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段相对表达水平为同步培养肝细胞株H2.35对照的3.13±0.83倍,且差异有统计学意义（P=0.047）;Notch1 mRNA相对表达水平为对照细胞的（0.38±0.08）倍,且差异亦有统计学意义（P=0.010）;0610009E02Rik lncRNA相对表达水平为对照细胞的（1.04±0.26）倍,但差异无统计学意义（P＞0.05）.经Western blotting检测发现,重组腺病毒感染后肝细胞Notch1蛋白表达水平较对照肝细胞减低,与Notch1 mRNA相对表达水平检测结果相一致.结论 成功构建竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体,重组腺病毒感染肝细胞H2.35后,可下调肝细胞内Notch1 mRNA表达水平及其蛋白表达水平,这为HVOD肝细胞损伤修复的深层机制研究奠定实验数据基础.