摘要：为建立一种可快捷鉴别检测猪肺炎支原体(Mhp)和猪鼻支原体(Mhr)的方法,针对Mhp的183基因和Mhr的p37基因保守片段,分别设计合成引物及TaqMan探针,优化反应条件,建立一种可同时检测Mhp和Mhr的TaqMan双重荧光PCR方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果表明,该方法特异性强,检测其他常见猪呼吸系统病原不发生交叉反应;对标准品pMD18-T-Mhp-183、pMD18-T-Mhr-P37的最低检测限分别达45.2 copies/μL和29.7 copies/μL,比普通PCR检测灵敏度提高10^(3)~10^(4)倍;该方法检测结果的批内与批间变异系数均小于2%。用该方法检测145份广西自治区内临床样品,从中检出82份Mhp和9份Mhr阳性样品。该方法可用于临床样品快速检测及实验室Mhp和Mhr的鉴定,可为Mhp和Mhr在猪群中的早期监测提供技术支持。

摘要：对现阶段我国装配式混凝土建筑构件尺寸偏差进行调研和实测研究,经汇总统计分析,明确构件尺寸偏差总体水平与存在的问题。根据现阶段施工技术水平,提出适宜的偏差控制指标和措施,包括模具设计时应充分考虑刚度问题、加强操作人员培训及管理、采取合理的构件存储方式等。

摘要：为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,本研究选择猪源β-actin为内参基因,根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证,并初步应用于临床样品的检测。结果显示,该方法可在45 min内完成对ASFV、PRRSV及猪源β-actin基因的特异性扩增;对ASFV、PRRSV及猪源β-actin标准品模板的最低检测拷贝数分别为7.87×101 copies/μL、1.19×102 copies/μL和5.99×103 copies/μL,同一模板的3次重复试验的组内及组间变异系数均小于2%;用该方法检测92份临床样品,未检出ASFV,检出19份PRRSV阳性样品。结果表明,本研究建立了一种可快速鉴别检测ASFV及PRRSV的多重荧光定量PCR方法,较普通PCR敏感性高103倍,可应用于ASFV和PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查。

摘要：【目的】建立猪捷申病毒(PTV)反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的检测方法,并应用于广西猪群PTV感染诊断。【方法】通过对GenBank中登录的PTV不同血清型基因序列,在5’端保守区设计一对特异性引物,经退火温度摸索及特异性和敏感性试验,建立PTV的RT-PCR检测方法,并对广西部分猪场腹泻病例进行猪捷申病的感染诊断。【结果】所建立的方法能特异性地扩增PTV,不能扩增猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪A群轮状病毒、猪C群轮状病毒、猪丁型冠状病毒。建立的方法具有较高的敏感性,可检测低至1.16 pg/μl的质粒模板及12.15 pg/μl的核酸模板。应用建立的RT-PCR方法对2018年3月-2019年4月从广西部分猪场采集的235份病猪腹泻粪便进行PTV临床检测,PTV阳性为24份,阳性率为10.21%。【结论】建立的PTV RT-PCR方法简单特异、灵敏度高,可适用于实验室PTV检测诊断。广西部分受检猪场已存在PTV感染,应予以警惕,加强监测与防控。

摘要：目的建立一种快速鉴别非结核分枝杆菌的聚合酶链式反应方法，并与直接测序法比较，探讨该方法的可行性。方法根据分枝杆菌16—23srDNA间隔区序列设计引物，建立检测分枝杆菌的PCR分型方法，并利用该技术对5例临床分离株进行PCR扩增。借助凝胶电泳分析和直接测序分析进行临床分离株的分子分型。结果5例分离株均耐利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、丁胺卡那、环丙沙星、左氧氟沙星、硫异烟胺、力克肺座和比嗪酰胺，为多重耐药菌株。PCR扩增结果和直接测序结果相吻合，均为脓肿分枝杆菌。结论分枝杆菌高度保守的16～23srDNA间隔区序列可做为分枝杆菌鉴定的靶基因，建立快速、特异、敏感的PCR扩增体系，且从基因水平上可对分枝杆菌进行分子分型．为临床治疗提供快速、准确的实验数据。

摘要：目的观察膝关节持续被动活动仪(CPM)体内力学刺激对组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损效果的影响。方法研究、设计和制造能够适用于体内力学刺激羊膝关节软骨缺损修复的膝关节连续被动活动仪(CPM);将实验动物(山羊膝关节双髁负重区制造直径6 mm软骨缺损)分为三组:空白组:单纯缺损未植入修复组织;藻酸钙+骨膜+细胞组:藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区;藻酸钙+骨膜+细胞+CPM组:藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区,术后早期接受CPM锻炼。分别于术后3个月、6个月、12个月(12个月组仅包括CPM力学刺激组)取材,通过修复组织的大体、组织学观察及其评分比较3组软骨修复效果。结果藻酸钙复合软骨细胞能够较好地修复羊负重区关节面软骨缺损,将缺损修复的大体观察、组织学等结果进行单因素统计学分析,发现接受体内CPM力学刺激组效果最好,其修复组织中透明软骨比例最多,其次为藻酸钙+骨膜+细胞组。结论膝关节持续被动活动仪(CPM)体内力学刺激能够促进组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损的效果。

摘要：目的建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法。结果检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10fg和20CFU/反应体系;特异性好,对71株细菌的检测符合率达100%。20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符。70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出。结论建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌。

摘要：目的研究慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAi)对大鼠下丘脑细胞中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)的抑制作用。方法根据大鼠SOCS3基因(NM053565),用Ambion在线软件选择3个靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamHⅠ和XhoⅠ酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-lenti-GFP连接产生pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取逐孔稀释滴度法测定病毒滴度,然后转染大鼠下丘脑细胞,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR方法检测RNAi组(siRNA1,siRNA2,siRNA3)、空白细胞组和阴性序列组(siRNA-Negtive)中SOCS3的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。系列稀释法检测慢病毒悬液的滴度为1.0×1010 TU/L。荧光实时定量PCR检测显示慢病毒感染大鼠下丘脑细胞后,与空白细胞组相比,3个RNAi组都有不同程度的抑制SOCS3表达,其中siRNA1组的抑制效果最好,可使SOCS3 mRNA表达下调达80%。结论构建的pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒载体可有效地抑制大鼠SOCS3的表达,为以SOCS3基因为靶点的相关疾病的基因治疗研究奠定基础。

摘要：目的通过问卷调查,从临床科室角度对平均住院日影响因素进行分析,为优化医院合理缩短平均住院日的医疗管理体系提供建议。方法某肿瘤医院设计了《关于临床科室平均住院日影响因素问卷调查表》,对医院22个临床科室采用"自填调查问卷"的方式进行调查。结果总体来说,临床科室认为辅助检查出报告时间、入院时合并其他疾病的治疗、治疗后出现并发症分别是治疗前、治疗中、治疗后对平均住院日影响较大的因素。但是肿瘤外科、肿瘤内科及肿瘤放疗科之间的认识互有差异。结论平均住院日问卷调查结果为寻找平均住院日影响因素并优化该院合理缩短平均住院日的医疗管理体系提供了一些较好的建议和新思路。

摘要：在中深部井段实施气体钻井作业时,需用气体将钻井液置换出井筒,因受注气设备额定工作压力限制,常常采用分段气举方式,耗时长,时效低。针对中深井气举现状,提出了基于气液两相流的充气气举工艺技术,建立了充气气举压降计算模型,通过现场应用表明,该模型计算结果与实际情况较符合,可用以指导现场实践。充气气举工艺能缩短气举时间,提高气体钻井时效,在中深部井段气体钻井中得到广泛应用,已成为气体钻井重要的配套技术之一。