摘要：目的 :构建RAC1基因小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),探讨RAC1对人舌鳞癌CAL27细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。方法:针对人RAC1基因设计并合成3条si RNA,通过脂质体介导转染进3组人舌鳞癌细胞CAL27中,以抑制RAC1的表达;同时设置阴性对照组(转染无关核苷酸序列)和空白对照组(未转染),采用实时荧光定量PCR检测细胞中RAC1 m RNA的表达,Western免疫印迹实验检测RAC1、PAK1、LIMK1蛋白的表达,通过划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:细胞转染48 h后,与阴性对照组和空白对照组相比,RAC1干扰组细胞RAC1 m RNA和蛋白表达均显著下降(P<0.05),PAK1、LIMK1蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。结论:沉默RAC1基因可抑制舌鳞癌CAL27细胞的侵袭和转移,其机制可能与细胞内PAK1、LIMK1的表达下调有关。

摘要：[目的]对金黄色葡萄球菌前噬菌体的PT1028ORF001基因进行生物信息学分析,并进行原核表达,为金黄色葡萄球菌前噬菌体基因的功能研究提供参考数据。[方法]将金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株功能未知的基因通过BLAST比对,从中发现了一个噬菌体PT1028的基因序列,将该基因命名为PT1028ORF001。使用Protparam、Prot Comp9. 0、NCBI保守结构域数据库、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等在线生物信息软件,分析PT1028ORF001蛋白的理化性质、亚细胞定位、保守结构域、跨膜区域、磷酸化修饰位点、二级结构和三维结构。用自行设计的引物扩增PT1028ORF001基因,扩增产物经酶切回收后与原核表达载体p ET-32a相连接,构建重组表达质粒,将该重组质粒转化E. coli TG1内,经菌落PCR鉴定后,增菌培养并提取质粒,再转化E. coli BL21 (DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测分析。[结果]PT1028ORF001蛋白由569个氨基酸组成,相对分子质量为64 671. 34 Da,等电点为8. 07,负电荷氨基酸残基总数为71个,正电荷氨基酸总数为73个,分子式:C2894H4530N762O885S16,原子总数9087个,是一种稳定的亲水蛋白质,定位于细胞膜上,与功能未知的DUF927蛋白超家族具有高度同源性,第202-223、240-258位氨基酸分别形成一个典型的跨膜区,潜在的磷酸化修饰位点共71个,二级结构中ɑ螺旋占比最高(40. 60%),其次是无规则卷曲(39. 89%),三维空间结构与二级结构预测结果相符。成功构建了表达载体p ET-32a(+)-PT1028ORF001,经IPTG诱导后重组蛋白获得了表达,蛋白相对分子质量为82. 4 k Da。[结论]PT1028ORF001基因的生物信息学分析结果以及该基因的成功克隆与表达,为深入研究该蛋白及其他金黄色葡萄球菌前噬菌体基因的功能奠定了一定基础。

摘要：根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4(Nonstructural protein4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21(DE3),诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Western blot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析(Ni-NTA)纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB/c小鼠,抗血清ELISA效价达1∶16 000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。

摘要：目的:通过建立山羊全颞下颌关节置换模型,探讨植入后山羊的血液学和组织学变化,评价自行设计的人工全颞下颌关节假体的安全性。方法:取健康6个月龄山羊10只,随机选取6只山羊,根据其颞下颌关节螺旋CT所测参数,采用Surgicase5.0软件重建三维头颅模型,制备人工全颞下颌关节假体,选用超高分子量聚乙烯制备关节窝衬里,钛合金制作下颌固位柄及关节窝上方钛板,钴-铬-钼合金制备髁突。另4只作为正常对照组。手术切除实验组6只山羊右侧髁突及关节盘,进行全关节置换。术前1周及术后1周、1、3、6个月采血,测定肝、肾功指标。术后3、6个月取山羊的肝、肾组织和假体周围及对侧下颌骨组织,通过TUNEL染色检测凋亡细胞并进行组织病理染色。采用SPSS16.0软件包对数据进行成组t检验。结果:所有实验动物均存活至实验完成,能够正常进食。各时间点实验组与对照组肝、肾功指标差异无显著性,肝、肾组织病理染色以及凋亡率与正常对照组一致,实验侧与对照侧骨组织均无明显炎症反应,实验侧组织在术后3个月成骨细胞较对照侧增多,术后6个月与对照侧组织无显著差异。结论:自行研制的全颞下颌关节假体具有较好的生物相容性和生物安全性。

摘要：在实验室条件下,了解浸渍法、水热处理法、固相交换法下乙烷氧化脱氢制乙烯Ni基催化剂的作用。

摘要：绿色算力系统各节点间相互依赖,从底层架构到上层应用,节点关联程度高,呈现出智能联动、一体化等特征,体系内节点风险具有向关联节点传播和扩散的特点,对整个算力系统体系稳健运营带来威胁,并且对风险点的溯源抑制和风险链路的分析阻隔需要花费较高技术和资源成本。因此,提出资源约束下经济最优的绿色算力系统风险区域响应模型。首先,设计混合风险节点功率弹性压缩和过负载节点退出机制的响应策略,缓解高负载系统节点在局部区域内的聚集度。其次,在资源约束视角下,构建计及经济性最优和安全性最高的绿色算力系统区域风险评价指标,据此设计绿色算力系统风险区域应急策略,并基于群体自适应全局优化思想利用差分进化算法对响应模型进行求解,实现最优经济成本下的系统节点区域隐患抑制。最后,进行仿真实证分析,验证了所提方法的有效性。

摘要：2005年是中国承诺碳减排目标的基准年份,因而也是中国城市碳减排战略制定和近中期低碳转型的基准年份和对照年份。中国城市2005年CO_2排放数据的一致性、全面性和精准性对于中国所有城市和每个具体城市的目标考核和评估都有重要意义。基于中国高空间分辨率网格数据(CHRED 2.0)、城市层面统计数据以及大量现场调研和走访,建立2005年中国城市CO_2排放数据集,包括工业能源排放、工业过程排放、农业排放、服务业排放、城镇生活排放、农村生活排放、交通排放7个部门的直接排放数据和间接排放数据。该数据集的建立汇总了86名研究人员的工作成果,在企业、城市不同行业与部门、城市工业和城市总化石能源等不同层面进行了大量的交叉验证和数据分析,有效保障了数据的精确性和准确性。结果显示,2005年中国城市碳排放呈现出较大的体量差异和空间格局差异。排放前10的城市几乎比排放后10的城市的排放量高出两个数量级。高排放城市基本都是城市群的核心城市。东部城市直接排放占全国直接排放比例最高,达到44.59%,其次是西部城市21.76%,中部城市22.70%,东北城市10.95%。