摘要：基于PCV2滚环复制原理,在分析PCV2不同基因亚型代表毒株基因组结构和序列的基础上,设计2对引物用于PCR扩增PCV2基因组序列。以从收集到的疑似PCV2感染的10份猪血清样品中提取的DNA为模板,用设计的引物扩增目的片段,并进行测序分析,1株为PCV2a型,4株为PCV2b型,5株为PCV2d型。每种基因型毒株中各选取一个样本,利用上述2对引物进行PCR扩增,并将扩增产物克隆至pEASY-Blunt simple载体中,通过双酶切连接2个PCR片段,构建含有约1500 bp重叠序列的PCV2基因组的质粒。通过脂质体转染法将含PCV2全基因组的质粒转染至PK-15细胞进行病毒拯救,经PCR和IFA两种方法验证,证明成功拯救出3个基因型的PCV2毒株。通过对PCV2全基因组结构及序列分析,该方法同样适用于PCV2g、PCV2h基因型病毒的感染性克隆构建。本研究建立了一种基于反向遗传学技术的PCV2感染性克隆的构建方法,为开展PCV2的病原学研究提供了技术支持。

摘要：猫氨基肽酶N(fAPN)参与猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的感染过程,为研究f APN对FIPV复制的影响,本研究针对f APN第14外显子设计了1对sg RNA,将sg RNA退火后克隆至p X458质粒中,构建同时含有Cas9蛋白和sg RNA的重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,瞬时转染猫肾细胞(CRFK)中,24 h后通过流式细胞仪分选带有绿色荧光的单克隆细胞。单克隆细胞经稳定传代培养后,细胞中的绿色荧光消失,对细胞进行PCR和测序,结果显示:3株单克隆细胞在f APN第14外显子有1个碱基的插入,造成移码突变,导致f APN不能正常表达,表明敲除f APN蛋白的CRFK细胞系正确构建,命名为KO-APN14。将FIPV分别感染CRFK细胞及培养20代的KO-APN14细胞,48 h后通过间接免疫荧光试验(IFA)检测FIPV N蛋白的表达;将FIPV分别感染CRFK细胞及KO-APN14细胞,在感染4 h、12 h、24 h、36 h时采用RT-q PCR分别检测FIPV N基因、视黄酸(维甲酸)诱导基因I(RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、Toll样受体3(TLR3)、干扰素β(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的转录水平。IFA结果显示:感染FIPV的CRFK细胞出现绿色荧光,未感染FIPV的CRFK细胞、未感染FIPV的KO-APN14细胞及感染FIPV的KO-APN14细胞均无绿色荧光;RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后病毒N基因的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够极显著抑制FIPV N基因的转录(P<0.0001);RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后上述各细胞因子的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够抑制RIG-I、MDA5、TLR3、IFN-β、IL-6、IL-10、TNF-α及f APN的转录。综上所述,f APN是FIPV在侵入细胞及病毒复制过程中发挥重要作用,并在FIPV引起的炎症反应过程中起关键作用。本研究为f APN在免疫炎症反应中作用的研究提供科学依据,并为培育基因编辑抗病育种猫奠定实验基础。

摘要：在当代中国话剧创新发展过程中,与不同国家表演艺术的对话交流,对自身发展起到了非常重要的作用。20世纪80年代初,美国戏剧作家、导演阿瑟·米勒携代表作《推销员之死》来华,与北京人民艺术剧院合作将该剧搬上舞台,公演之后引起极大反响。这部由中美两国艺术家携手打造的佳作取材于生活,人物塑造生动,艺术手法新颖,具有丰富的现代性内涵,其独特的“梦碎”主题为我国原创剧本(尤其是社会悲剧和历史剧)的创作提供了有益参考。此后,锦云、李龙云等大批剧作家在兼收并蓄博采众长的基础上结合本土经验,广泛发掘本民族戏剧艺术自身的潜力和创造力,不断地进行探索和创新,创作出数量众多的现实题材和历史题材原创话剧作品,有力地推动了当代现实主义戏剧的发展。

摘要：角色创意是动画片及卡通形象健康发展的源头之一,也是关键的一环,无论是前期的造型,还是后期市场衍生品的开发,都离不开角色造型。本文将从动漫的角度对池州傩戏面具进行分析、归纳,挖掘其背后深刻的文化内涵,再从角色塑造、文化传承等方面探讨池州傩戏面具在动漫角色创意中的独特作用。

摘要：An improved design method of pervious concrete was proposed to lower the deviation between the designed and actual porosity and maintain both mechanical property and permeability of pervious concrete. The improved design method is mainly based on the optimal volume ratio of paste to aggregate(VRPA), which was determined by testing the average thickness of cement paste coating aggregate. The performances of pervious concrete designed by the traditional method and the improved one were compared. The results show that with the increase of designed porosity, the reduction of compressive strength and flexural strength of pervious concrete designed by the improved method is significantly smaller than those designed by the traditional one. The maximum deviation between the designed and actual porosity of the pervious concrete by the improved method is only 1.54%, which is far less than 8.7% obtained by the traditional one. Micro-structural analysis shows that the porous distribution of pervious concrete designed by improved method exhibits better uniformity.

摘要：为解决领域新闻中词汇使用频率对输入预测准确度的影响,提出一种面向领域新闻的词汇输入预测方法,结合样本修剪提升LSTM应用于领域新闻词汇预测中的准确性。利用文本的词序关系形成词汇网络,构建词汇相关度度量模型计算词汇间的相关度,依据词汇间的强弱关系进行词汇修剪。基于词序关系,采用LSTM进行训练,生成词汇输入预测序列。实验结果表明,相比传统LSTM模型,所提方法能够提升平均4.73%的准确率,验证了所提方法的可行性与有效性。

摘要：针对传统单斜式模数转换器(Analogue-to-Digital Conversion,ADC)和串行两步式ADC在面向大面阵CMOS图像传感器读出过程中的速度瓶颈问题,本文提出了一种用于高速CMOS图像传感器的全并行两步式ADC设计方法,该ADC设计方法基于时间共享和时间压缩思想,将细量化时间提前到粗量化时间段内,解决了传统方法的时间冗余问题;同时针对两步式结构在采样过程中的电荷注入和时钟馈通问题,提出了一种基于误差同步存储技术的误差校正方法,消除了采样电路非理想因素对ADC性能的影响.本文基于55 nm 1P4M CMOS工艺对所提方法完成了详细电路设计和全面测试验证,在模拟电压为3.3 V,数字电压为1.2 V,时钟频率为250 MHz,输入信号为1.472 V的设计条件下,本文设计实现的13 bit ADC转换时间为512 ns,DNL(Differential NonLinearity)为+0.8/-0.8LSB,INL(Integral NonLinearity)为+2.1/-3.5LSB.信噪失真比(Signal to Noise and Distortion Ratio,SNDR)达到70 dB,有效位数为11.33 bit,列级功耗为47μW.相比现有的先进ADC,本文提出的方法在保证低功耗、高精度的同时,使ADC转换速率提高了74.4%以上,为高速高精度CMOS图像传感器的读出与量化提供了一定的理论支撑.

摘要：结合国家标准GB 51427-2021《自动跟踪定位射流灭火系统技术标准》的规定,通过与GB 50084-2017《自动喷水灭火系统设计规范》、CECS 263:2009《大空间智能型主动喷水灭火系统技术规程》等标准的对比,分析了自动跟踪定位射流灭火系统的选型及适用范围,对部分设计要点进行了探讨,提出了自动跟踪定位射流灭火系统的工程应用技术的要求。

摘要：人类对于美的追求从刚刚产生文化起就从未停止过,而上世纪以来,动漫作为一个新兴的领域也伴随着不断的成长与成熟。在动漫的领域里,也存在着对美的审视和要求。在社会逐步走向多元化的今天,动漫美学在世界各国的文化差异中一步步走来,引领了一个个艺术潮流,也影响着一代代人的心路历程。面对当今日新月异的发展,在各个文化存在相融相通,又强烈碰撞的大前提下,动漫美学将继续保持与时俱进的姿态,给人们接连不断的美的感受。从动漫审美概念与发展历程、不同国家研究现状以及未来的发展趋势等方面对动漫美学进行了相关分析。

摘要：为避免办公建筑冬季采暖能耗受墙体保温性能等多因素影响,设计一种基于BIM和SVM的办公建筑冬季采暖能耗预测模型。使用Revit Architecture软件构建办公建筑参数化BIM模型。在建模前设定相关参数,对影响因素实施简化处理。利用Revit构建包括柱、梁、墙等办公建筑的主体参数化模型;利用Revit MEP构建供暖管道系统的参数化模型。利用遗传算法改进SVM算法并构建办公建筑冬季采暖能耗预测模型,实现冬季采暖能耗预测。测试结果表明,设计模型的逐时预测准确性与逐日预测准确性都较高,建模时间在5000 s左右,预测时间较短。