摘要：为了建立一种用于羊驼易感的羊口疮病毒(ORFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)、口蹄疫病毒(FMDV)、蓝舌病病毒(BTV)鉴别的多重PCR检测方法,根据GenBank中公布的ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV参考株基因序列分别设计特异性引物,优化引物、dNTP、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度,通过敏感性和重复性检验,并对60份羊驼粪便样品和35份羊驼咽拭子样品进行验证。结果显示,所建立的多重PCR方法能够有效区分ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV,最低检测限分别为3.18×10^(4)copies/μL、3.13×10^(1)copies/μL、3.06×10^(1)copies/μL、2.95×10^(2)copies/μL。结论:所建立的多重PCR方法能够同时快速鉴别羊驼感染的ORFV、BVDV-1、FMDV和BTV,具有较高的应用价值。

摘要：随着预制拼装桥墩的应用,出现拼接缝的构造和钢筋混凝土保护层厚度增加的现象,需修正原有的现浇混凝土结构裂缝宽度计算公式。研究基于2个足尺实心墩静力试验的结果,总结了预制拼装桥墩裂缝分布的特征,对裂缝的机理进行分析,提出适用于灌浆套筒预制拼装桥墩的裂缝宽度计算公式。试验结果表明,预制桥墩的首次开裂荷载是现浇桥墩的96%。墩底裂缝达到0.2 mm时,预制桥墩的开裂特征荷载是现浇桥墩的1.06倍。研究提出的灌浆套筒预制拼装桥墩压弯裂缝宽度计算公式符合套筒的开裂机理,具有针对性。

摘要：目的:分析不同生长模式与7~17岁儿童青少年代谢综合征之间的关系,为我国儿童青少年代谢综合征的预防与控制提供依据。方法:采用横断面研究设计,利用2012年卫生公益性行业科研专项“学生重大疾病防控技术和相关标准研制及应用”项目收集的数据,选择其中体格测量及血生化指标数据完整的10176名7~17岁的中小学生作为研究对象。使用二元Logistic回归模型分析不同生长模式与7~17岁儿童青少年代谢综合征的关系。结果:儿童青少年代谢综合征患病率为6.56%,其中男生为7.18%,女生为5.97%。迟缓性生长组发生代谢综合征的风险是正常性生长组的1.42倍(95%CI:1.19~1.69),追赶性生长组发生代谢综合征的风险是正常性生长组的0.66倍(95%CI:0.53~0.82);经性别、年龄等因素校正后,迟缓性生长组发生代谢综合征的风险为正常性生长组的1.25倍(95%CI:1.02~1.52),追赶性生长组发生代谢综合征的风险与正常性生长组的差异无统计学意义(OR=0.79,95%CI:0.62~1.01);分层分析显示,不同生长模式与代谢综合征的关联在7~12岁年龄组、城市和汉族学生群体中具有统计学意义。结论:不同生长模式与儿童青少年代谢综合征之间存在关联,迟缓性生长儿童青少年发生代谢综合征的风险高于正常性生长组,提示应当注意儿童青少年的生长发育,及时纠正其迟缓性生长,预防不良健康结局的发生。

摘要：目的:构建针对小鼠Toll样受体4(TLR4)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价对RAW264.7细胞TLR4mRNA及蛋白水平的抑制效果;观察对TNF-α,MIP-2水平及p38-MAPK,ERK1/2磷酸化水平的影响.方法:根据siRNA设计原则并经BLAST比对,设计合成7条siRNA双链复合体,体外退火后在T4连接酶作用下连接入重组载体pSilen-cerTM4.1-CMV neo plasmid,连接产物转化JMl09感受态细胞,筛选阳性克隆并提取重组体,行HindⅢ及BamHⅠ双酶切,酶切产物经聚丙稀酰胺凝胶电泳确定插入片段,测序鉴定;RT-PCR检测TLR4mRNA水平变化,间接免疫荧光及Western Blot检测TLR4蛋白水平变化;用LPS刺激转染细胞,观察TNF-α及MIP-2水平的变化,Western Blot检测p38-MAPK及ERK1/2磷酸化水平的变化.结果:双酶切及测序证实重组载体构建成功;体外实验表明,RAW264.7细胞中TLR4mRNA及蛋白水平均降低;TLR4siRNA抑制LPS对TNF-α及MIP-2表达的上调作用,LPS对p38-MAPK及ERK1/2的活化作用亦被TLR4siRNA下调.结论:TLR4siRNA表达载体在体外可下调RAW264.7细胞的TLR4表达,抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,对LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α及MIP-2的分泌有抑制作用,TLR4siRNA可望作为调控LPS信号通路的一个有效工具.

摘要：为建立快速特异的西尼罗河病毒(WNV)检测方法,本研究根据WNV基因保守区域基因序列,采用Primer Explorer Version 4设计特异性的重组酶聚合酶扩增(RPA)引物和探针。经过引物筛选和条件优化,建立了在39℃恒温条件下15 min内即可完成的实时荧光RT-RPA方法。本方法能特异性检测出WNV,且与蓝舌病毒(BTV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核酸检测没有交叉反应。本方法灵敏性强,最小检出量为5.25×10^(2)拷贝/μL。采用创建的RT-RPA方法检测72份牛或猪的临床样品,结果与实时荧光定量PCR方法相符。说明本试验创建的WNV RT-RPA方法操作简便、灵敏度和特异性高,适用于WNV监测、基层实验室或出入境口岸对WNV的现场快速检测。

摘要：为了建立一种能鉴定大肠杆菌O8、O9血清型的高效、快速的双重PCR方法,参考Gen Bank中大肠杆菌O8、O9血清型的O抗原合成基因簇序列筛选特异性靶标基因并设计合成2对PCR引物,通过优化反应条件,分析双重PCR方法的特异性、敏感性,通过检测大肠杆菌临床分离株验证双重PCR的实用性。结果显示,所建立的双重PCR方法可有效鉴定O8、O9血清型大肠杆菌,对其他血清型大肠杆菌及菌株则无交叉反应,表明PCR方法的特异性好;O8和O9血清型的菌体最低检出限分别为1×10^(3)CFU/m L和1×10^(4)CFU/m L,其DNA最低检出限分别为10 pg/μL和500 pg/μL。临床分离菌株检测显示,双重PCR检测结果与传统血清凝集结果一致。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可有效、特异、灵敏、快速鉴定大肠杆菌O8、O9血清型,为大肠杆菌O8、O9血清型检测及其流行病学调查提供了新的技术手段。

摘要：背景:单纯收缩期高血压(isolated systolic hypertension,ISH)是老年人的常见病,严重危害老年人的健康。中医及中西医结合治疗模式在改善老年ISH患者生活质量以及保护靶器官等方面具有一定优势,但需要进一步的循证医学研究。目的:观察中医(降压胶囊)及中西医结合(降压胶囊联合尼莫地平)治疗模式对老年ISH患者血压、血管活性物质的影响及其安全性。设计、场所、受试者和干预措施:采用多中心、随机双盲、阳性对照的试验设计。按标准入选中国中医科学院西苑医院、北京延庆县中医院及延庆社区卫生服务中心的老年ISH患者270例,采用随机区组法分为中医组(降压胶囊联合尼莫地平模拟药)、中西医结合组(降压胶囊联合尼莫地平)和西医组(尼莫地平联合降压胶囊模拟药),每组各90例。疗程为4周。主要结局指标:观察各组治疗后诊室血压和动态血压水平,血管活性物质如内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、血栓素B_2(thromboxane B_2,TXB_2)和6-酮-前列腺素1α(6-ketoprostaglandin1α,6-keto-PGF1α)水平的变化,并评价其安全性。结果:治疗结束后,中医组脱落10例(80例完成试验),中西医结合组脱落14例(76例完成试验),西医组脱落5例(85例完成试验)。治疗后各组收缩期血压值低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05),中西医结合组收缩期血压明显低于中医组或西医组(P<0.05)。治疗后各组24 h平均收缩压及昼间平均收缩压明显降低,中西医结合组夜间平均收缩压亦明显降低,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05);中西医结合组24 h平均收缩压和昼间平均收缩压低于中医组和西医组(P<0.05)。治疗后各组患者血清NO、血浆6-keto-PGF1α水平均升高,而血浆ET-1和TXB_2水平降低(P<0.05),且中西医结合疗法对降低血浆TXB_2含量的作用明显优于中医或西医疗法(P<0.05)。结论:中医及中西医结合治疗模式应用于老年ISH患者的疗效肯定,安全性高,且中西医结合治疗模式在降压及相关指标改善等方面具有明显协同增效的优势,值得进一步研究。

摘要：根据应用型本科院校的实际情况,从最优化理论的视角来窥测模具方向实践教学优化设计的基本理论问题,拟建立以模具生产全过程为对象、以"3+1"为方向的三维立体教学模式。该模式对学生进行实践教育教学的改革与探索,以期提高学生分析问题和解决问题的能力,使其在实践过程中及早地接触生产、认识社会,从而起到培养学生创新能力、提高学生综合素质的作用,最终使学生成为具有设计、分析和加工综合能力的创新型模具工程师。初步实践充分证明该改革对人才的培养和专业的发展具有积极意义。

摘要：为建立猪圆环病毒3型(PCV3)的快速简便检测方法,根据PCV3 Cap基因的保守序列设计多对引物和探针,建立了一种实时荧光RAA检测方法。通过筛选引物和优化试验条件,验证对常见动物疾病病毒的特异性,并与PCR方法在敏感性上进行比较。结果表明,PCV3与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪A型塞内卡病毒(SVA)和口蹄疫病毒(FMDV)等核酸无交叉反应,可在39℃下20 min内快速特异完成。该方法灵敏度较高,最低检出浓度为10^2copies/μL。应用该方法对115份猪临床样品进行检测,检测结果与PCR方法一致。结果表明,该方法操作简单、快速灵敏、结果可靠,可用于PCV3的实验室检测和现场诊断。

摘要：通过田间试验,研究了不同施肥方式对菜园土壤环境质量及作物产量的影响.结果表明：在试验设计范围内,施肥增加了土壤pH值和重金属Cu和Zn的含量,使土壤硝态N含量增加了9.85%～85.56%;在同一施肥条件下,施用养分促进剂或生物农药可降低土壤中硝态N的含量;施肥量的增多能显著增加辣椒产量,施用氮肥525kg/hm^2＋化学农药处理的产量最高,与对照相比增加了78.93%.