摘要：本文通过在广州海珠区某深基坑工程中应用双轮铣削搅拌水泥土墙(CSM工法)在砂、岩复杂地质条件中形成止水帷幕,阐述了双轮铣削搅拌水泥土墙(CSM工法)的方案设计要点及施工工艺,对在砂、岩复杂地质条件下深基坑开挖形成止水帷幕具有参考价值。

摘要：由于爆破矿石块度达不到设计要求、喷淋不均匀、矿堆出现淋浸死角等问题,使得赣南某铀矿采用的浅孔留矿筑堆浸出法铀浸出率偏低、浸出周期长、生产效率低。结合该铀矿开采的实际情况,对浅孔留矿筑堆浸出法做了改进,即根据物探编录结果,有选择性地对高、低品位矿石进行分爆分采,高品位矿石全部出窿地表堆浸,低品位矿石在地下采场浸出。这种改进后的方法被称为分采分爆留矿法。与浅孔留矿筑堆法相比,分采分爆留矿法铀的采场浸出总回收率提高了17.2%,从而最大限度回收了铀资源。

摘要：目的评价2种恩替卡韦制剂在健康人体的生物等效性。方法采用随机、双周期、自身交叉的试验设计。36例健康男性志愿者单次口服试验制剂(恩替卡韦分散片)或参比制剂(恩替卡韦片)1 mg,血浆样品采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定,计算两者的主要药物动力学参数,进行生物等效性评价。结果恩替卡韦血药浓度在0.05～20μg.L-1与峰面积线性关系良好(R2=0.996 3),最低定量浓度为0.05μg.L-1,批内及批间精密度RSD<15%;服用试验制剂或参比制剂后血浆中恩替卡韦的Cmax分别为(7.63±1.91)和(9.75±2.62)μg.L-1;tmax分别为(0.67±0.22)和(0.63±0.19)h;t1/2分别为(62.35±22.36)和(62.09±33.39)h;AUC0-∞分别为(29.08±4.57)和(31.88±6.57)μg.h.L-1;AUC0-tn分别(22.80±4.19)和(25.57±5.06)μg.h.L-1;试验制剂的相对生物利用F0-tn、F0-∞分别为(90.55±14.42)%和(93.36±15.96)%。结论试验制剂和参比制剂具有生物等效性。

摘要：目前研究表明整合素β3亚基是多种病毒的细胞表面受体,然而整合素β3亚基与不同病毒受体结合蛋白VAP相互作用的分子机制还不完全清楚。为此,设计引物,采用RT-PCR方法扩增人β3亚基包膜外区约2.1kb片段,克隆入毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中。双酶切鉴定挑取阳性克隆pPIC3.5K-β3,测序证实目的基因序列正确。将pPIC3.5K-β3转化毕赤酵母工程菌GS115,在浓度为3.0mg/mL的G418选择培养基上,筛选出含有多拷贝目的基因的阳性菌株,PCR可扩增出约2.1kb的目的条带。阳性菌株经1%甲醇诱导表达,Western-blot可在酵母菌体中检测到约80kDa的目的蛋白条带。上述结果表明,成功构建了人整合素β3亚基毕赤酵母表达载体,筛选获得多拷贝阳性菌株并成功表达,为进一步研究人整合素β3在病毒感染中的作用及其单克隆抗体的制备奠定基础。

摘要：目的构建3种截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性;IPTG诱导、表达和纯化rEm18.1-GST、rEm18.2-GST和rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot进行初步鉴定。结果成功构建了3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3重组表达质粒;SDS-PAGE检测表明rEm18.1-GST、rEm18.2-GST、rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,在分子质量单位为41、45.5和45.5ku处有表达条带;Western blot显示3种重组蛋白均能被AE病人血清识别。结论成功构建了截短的pET41a-Em18.1、pET41a-Em18.2和pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达的3种重组蛋白均具有良好的抗原性,为Em18抗原表位分析奠定了基础。

摘要：以8年生‘骏枣’为研究对象,研究枣树在一定水分条件下氮磷钾不同的施肥配比对其产量和生长性状的影响。试验结果表明,在施肥设计水平范围内,过高的氮、磷、钾肥,枣树枣吊结果数、枣果鲜重、单株结果数、产量、净收益没有显著增加;增施氮肥可以促进枣吊生长,但产量、净收益与常规施肥处理比较反而显著降低;适宜的灌水和施肥是枣树高产的基本条件。依据氮磷钾不同施用量与产量回归综合分析得出,在灌水总量为330 m^(3)/666.7 m^(2)条件下,以‘骏枣’果实产量为经济目标时,施氮量26.16 kg/666.7 m^(2),施磷量17.12kg/666.7m^(2),施钾量15.77 kg/666.7 m^(2)为最佳施肥配比。

摘要：目的制备硝苯地平阿替洛尔缓释胶囊并考察其中硝苯地平体外释放规律。方法通过均匀设计优化出硝苯地平缓释片的处方 ,并用Higuchi释药模式对硝苯地平的体外释放规律进行分析。结果硝苯地平片处方为硝苯地平 2 0mg,聚乙烯吡咯烷酮 1 0mg,羟丙基甲基纤维素 (HPMCK4M)1 0mg,乳糖 1 0mg。在此基础上制备出硝苯地平阿替洛尔缓释胶囊 ,即硝苯地平小片与阿替洛尔颗粒装制胶囊。结论硝苯地平小片符合Higuchi释药模式 ,硝苯地平累积释放百分率在 1、2、4、8h时分别在 1 5 %～ 2 5 %、2 5 %～ 4 5 %、4 5 %～ 80 %和 70 %以上。

摘要：为了培养本科生的分子生物学实验设计与操作技能,在实践教学中实现培养本科创新人才的目标,以用大肠杆菌发酵生产重组细菌碱性磷酸酶为案例,通过碱性磷酸酶基因的克隆、原核表达、发酵生产、提取纯化以及酶活性检测等系列实验,把本科的基因工程、发酵工程和生物化学3门综合性独立实验课程有机地组合成一个内容相关联的超大型综合性生物技术大实验,进一步凸显了生物技术中以基因工程技术为核心的上游核酸操作、中游发酵生产和下游蛋白分离纯化三大技术模块的有机联系,大大地提高了本科实验教学的综合性和研究性,提升了实践教学水平,取得了良好的教学效果。

摘要：MGF360-9L是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)重要的毒力基因,本实验室前期使用免疫共沉淀和液相色谱-质谱(IP-MS)联合技术,明确了MGF360-9L和宿主蛋白自噬/苄氯素1调节因子1(autophagy/beclin-1 regulator 1,Ambra 1)具有相互作用,现有的研究已经证实宿主蛋白Ambra 1在病原感染中发挥重要作用。为明确Ambra 1介导MGF360-9L对ASFV复制的调控作用及其机制,本研究构建Ambra 1真核表达质粒,使用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)和间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)技术,验证了Ambra 1和MGF360-9L的互作及互作区域。设计并合成Ambra 1的RNA干扰(RNAi)序列,运用实时荧光定量PCR(real-time q PCR,RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)技术,证明了Ambra 1过表达抑制ASFV的复制,下调Ambra 1的表达则能够促进ASFV的复制。此外也证明了Ambra 1剂量依赖性降解MGF360-9L蛋白。总之,本研究明确了宿主蛋白Ambra 1介导ASFV MGF360-9L抑制其复制的初步机制。该研究丰富了ASFV蛋白与宿主蛋白之间的互作调控网络,为进一步研究ASFV-宿主相互作用积累了数据。

摘要：鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的带有通用引物和酶切位点的特异性引物,通过对6株不同毒株的反复试验,优化了针对A片段VP2基因的常规反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法 (IBDV-VP2(604)-RT-PCR)和针对B片段VP1基因的RT-PCR检测方法(IBDV-VP1(642)-RT-PCR);针对A片段VP2基因设计特异性引物和探针,建立了优化IBDV特异性实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法(IBDV-VP2-rRT-PCR)。将传染性法氏囊病疫苗-法倍灵(IBDV-BLEN)疫苗株进行系列稀释,两种RT-PCR检测方法的灵敏度均为10-3,而IBDV-VP2-rRT-PCR检测方法灵敏度为10-4。所建立的三种分子生物学检测方法特异,与其他家禽病毒无任何交叉反应。通过对自2007年以来18批221份田间样品检测表明,所建立的方法准确可靠,适合对鸡传染性法氏囊病病毒进行快速灵敏检测和监测。