摘要：埃及伊蚊serpin23(丝氨酸蛋白抑制剂23)在雌蚊唾液腺特异高表达,是蚊虫唾液组分的主要蛋白之一。本文设计特异性引物序列,采用RT-PCR技术扩增获得埃及伊蚊广东电白株serpin23成熟肽序列,构建重组表达质粒pET-28a(+)-serpin23并测序验证。经IPTG诱导表达、KCl染色、切胶纯化获取了目的蛋白;制备了小鼠特异性抗serpin23蛋白多克隆抗体。结果显示:获得serpin23成熟肽序列,全长1 197bp,编码399个氨基酸。等电点pI为6.13,具有serpin结构域和一个功能未知的FAINT结构域。pET-28a(+)-serpin23重组质粒可表达了大小约为47 kDa、以包涵体表达为主的融合蛋白。Western Blot结果证明serpin23重组蛋白可以与抗-His标签和抗-serpin23抗体发生免疫反应,约47 kDa处产生特异性条带。本研究成功获得了埃及伊蚊广东电白株serpin23重组表达蛋白和抗serpin23多克隆抗体,为后续功能研究奠定基础。

摘要：针对悬挂式车辆中间车钩在列车动态调试过程中发生异响问题,本文从车辆运行工况、车钩结构组成、尺寸公差设计等方面分析了车钩可能出现异响的原因,并逐条分析验证。针对车钩出现异响的原因,提出结构优化方案,经过验证,方案优化后的结构完美解决了中间车钩的异响问题,提高了车辆运行过程中的可靠性和乘坐舒适性。

摘要：为建立猪Linda病毒(LV)的实时荧光定量PCR检测方法,本研究基于LV的Erns基因序列,设计并合成了实时荧光定量PCR引物和探针,经过优化退火温度、引物和探针的比例,建立了一种灵敏度高、特异性好且操作简便的LV实时荧光定量PCR检测方法。该方法具有良好的线性、稳定性及准确性,最低检出限为1×10^(1)copies/μL,批内和批间变异系数均小于2%,且该方法检测非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型时呈阴性。通过对不同模拟样品的检测结果进行比较分析,发现该方法能够检测到1×10^(1)copies/μL模拟DNA样品、1×10^(1)TU/mL模拟RNA样品。本研究建立的实时荧光定量PCR方法可用于LV的快速检测,为口岸检测、预防与控制由LV引起的进境仔猪先天性震颤提供了技术支持。

摘要：随着建筑科技的不断发展,钢结构桁架技术已在现代建筑工程中有了广泛的应用。基于此,结合某高层建筑项目,从吊装、搭建及焊接等方面针对裙房钢结构桁架施工进行了分析,并利用SAP2000软件对支撑胎架进行验算,得出胎架主肢的最大应力比为0.319,胎架传力梁和分配梁的最大应力比为0.424,两者均达到了设计及规范的要求,以期此次研究能够为类似建筑钢结构项目积累经验。

摘要：本研究根据GenBank已收录奶牛ApoB100基因序列,设计特异性引物获得目的基因。经pGM-T载体克隆,对重组质粒进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定并测序,序列同源性达100%;将目的基因连接到pET-28a表达载体中,提取质粒,转化到Rosetta(DE3)中,筛选的阳性克隆经IPTG诱导。SDS-PAGE初步分析表明,成功获得分子质量为35ku的蛋白质;Western blotting结果呈阳性,表明通过本试验成功获得了目的蛋白。

摘要：通过比较几款传统抗侧滚扭杆装置上所用的连杆下橡胶关节的结构及承载特性,设计了一款适用于高速摆式列车抗侧滚扭杆装置的连杆下关节结构。结果表明,该结构能很好地满足抗侧滚扭杆装置所需要的刚度及疲劳特性要求,适用在高速摆式车上使用。

摘要：目的研究高血压患者运动锻炼现状及影响因素,为今后实施健康促进干预和政策制定提供参考。方法对北京市顺义区879例已确诊原发性高血压患者进行问卷调查和体格检查,问卷基于健康信念模式设计,信效度良好。结果 879例高血压患者每日运动锻炼量M(Q)为3.8(0.0,10.0)千步当量。Kruskal-Walls秩和检验,文化程度(P<0.01)、家庭月收入(P<0.05)及高血压控制好坏(P<0.01)对日均千步当量存在影响。χ2检验,达到六千步/一万步比例从高到低依次为高中/中专/技校(45.8%/33.1%)、初中(40.8%/27.8%)、大专/大学及以上(35.3%/19.6%)、小学及以下(31.7%/20.2%),差异均有统计学意义(P<0.05);高血压控制好的患者(45.4%/33.9%)比例高于控制不好的患者(36.5%/23.1%),差异均有统计学意义(P<0.05)。健康信念模式各因素平均得分:感知到运动对健康的影响(22.5±3.4)分,客观障碍(11.1±4.9)分,主观障碍(6.5±3.4)分,自我效能(12.2±3.6)分,提示因素(12.2±3.7)分。多重回归分析,以日均千步当量为因变量,自我效能感、客观障碍和主观障碍的偏回归系数分别为0.493、-0.284、-0.312。结论目前高血压患者的运动锻炼量严重不足,可以通过采取一些措施来提高其自我效能,减少其主观和客观障碍,以促进高血压患者的运动。

摘要：根据Bcl4579丙酮酸脱氢酶基因序列设计引物，从苏云金芽孢杆菌BMB171菌株总DNA中扩增得到相应的丙酮酸脱氢酶基因DNA片段。将DNA片段装载到大肠杆菌构建pET—E1表达系统，再通过优化重组菌的表达条件获得有生物活性的丙酮酸脱氢酶。结果表明，pET—E1表达系统构建获得成功；优化的表达条件如下：培养基为TB＋M9（体积比1：1）、起始菌体密度OD600为4～5．5、诱导剂IPTG浓度为0．04mmol·L^-1。

摘要：基于放大单元实验研究了不同等离子体显示板(PDP)结构的放电特性。设计并制作了不同结构的放大单元实验屏,在相同条件下比较了不同放电单元的放电延时、红外强度和放电效率。结果表明,荫罩式PDP结构在放电性能上与传统的PDP结构相比有一定的优越性。这些结果对于优化荫罩式PDP结构、改善其性能有一定的指导作用。

摘要：目的探讨原核表达稀释复性的可溶性人FcγRⅡa（shuFcγRⅡa）的胞外区蛋白在体外与配体的结合活性。方法应用PCR技术从重组质粒pc3huRⅡ中扩增huFcγRⅡa的胞外区基因，将其克隆于原核表达载体pET-28a中。所构建的重组质粒经PCR和酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，制备融合蛋白包涵体。并采用多次洗涤法分离和纯化包涵体，用稀释法对纯化后的目的蛋白进行复性，ELISA和流式细胞术测定重组shuRⅡ在体外与配体的结合活性。结果扩增到了huFcγRⅡa的胞外区基因，所构建的pETshuRⅡ重组质粒经PCR和酶切鉴定与设计序列一致。转化B121（DE3）后，IPTG诱导目的蛋白表达率约为30％。SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量（Mr）约为24．8×10^3，与理论预期值一致。破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达，经多次洗涤后蛋白纯度大于90％。ELISA法测得重组shuRⅡ与人IgG在体外有良好的结合活性，流式细胞术测得重组shuRⅡ对配体与受体结合有抑制作用。结论本复性方法可得到和天然蛋白类似生物学活性的目的蛋白。